169098. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(5-amino-5-karboxivaleramido)- 3-acetoximetil-3-cefem -4-karbonsav fermentléből való kinyerésére

3 169098 4 Államok-beli szabadalmi leírás eljárásánál, ahol N-(karbalkil- vagy -ariloxi)-cefalosporin C keletkezik halogénformiátokkal végzett reakció során, melyet ugyancsak oldószeres extrakcióval választanak el. A 80 007 171 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás szerint végzett reakció, melynek során a cefalosporin C-t 2,4-diklórbenzoUhalogenidekkel vagy 4-klórbenzoilhalogenidekkel kezelik, majd a megfelelő cefalosporin C-származékot kikristályosítják, 62%-os kitermelést ad. Végezetül a 2 157 693 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságrahozatali irat olyan cefalosporin C izolálási eljárást ismertet, melynek során a cefalosporin C N-benzoilszármazékát választják el szolvens extrakcióval. A kitermelés jelen esetben 73%. A találmány szerinti eljárás során a cefalosporin C-t hidrogénklorid-akceptor jelenlétében p-nitro-benzoilkloriddal reagáltatjuk, a keletkezett N-(p-nitro-benzoil)-származékot vízzel nem elegyedő, szerves oldószerrel extraháljuk a reakcióelegyből, és a szerves oldószeres fázisból bepárlás útján vagy alkálifémmel vagy szerves aminnal kicsapva só formában nyerjük ki. A találmány szerinti új eljárás során az irodalomban eddig még nem ismertetett N-(p-nitro-benzofl)-cefalosporin C származékot, valamint ennek alkálifémekkel és szerves bázisokkal, például tercieraminokkal képzett sóit állítjuk elő. E vegyületek önmagukban ismert módon, könnyen átalakíthatók 7-amino-cefalosporánsawá. A cefalosporin C N-(p-nitro-benzoil)-szárrnazékává történő átalakítása gazdaságos reakció, mivel p-nitro-benzoü-kloriddal végezhető, amely viszonylag olcsó reagens, és a származék csak igen egyszerű izolálási és tisztítási műveleteket igényel, mivel a keletkezett p-nitro-benzoát alkálifémekkel vagy szerves bázisokkal - például tercieraminokkal — sókat képez, melyek szerves oldószerekből az eddig ismert hasonló anyagokhoz képest meglepő tisztasággal kristályosodnak ki. A fent említett vegyületek kitermelése magas, minden esetben 80 és 95% között van. Ezen kívül a találmány szerinti eljárást nem befolyásolja a fermentlé cefalosporin C koncentrációja, nagy és kis koncentrációjú — például már 500-600 -y/ml töménységű - fermentlé is feldolgozható. Sók például a nátriummal vagy N,N-dimetil-benzilaminnal képzett sók, melyek rövidszénláncú alkanolokból, alkilacetátokból vagy alifás ketonokból könnyen kikristályosíthatók. Egyéb előnyösen használható amin például az N,N-dibenzilarrún, N,N-dimetilanilin, N,N-dietilanilin, N,N-dietil-ciklohexilamin, N,N-dietil-benzilamin, N,N-etil-piperidin és N-metil-pirrolidin. A kinyerési eljárás során előnyösen a cefalosporin C-t tartalmazó fermentlevet szűrés után 5-15 térfogatszázalék, vízzel elegyedő vagy részlegesen elegyedő szerves oldószerrel, például acetonnal vagy etÜacetáttal hígítjuk és 5-10C°-ra lehűtjük. A fermentlé pH-ját 6,5 - 8-ra, előnyösen 7,0 - 7,7-re állítjuk be bázis, mint híg nátrium-hidroxid, nátrium-karbonát vagy nátrium-hidrogén-karbonát segítségével. Ezután lassan, keverés közben vízzel elegyedő vagy részlegesen elegyedő szerves oldószerben, mint például acetonban vagy etil-acetátban oldott p-nitro-benzoil-kloridot adunk hozzá. A pH-értéket állandóan 6,5-8, előnyösen 7,0-7,7 között tartjuk alkalmas hidrogén-klorid-akceptor 5 hozzáadása által és a hozzáadás alatt a hőmérsékletet 5-10 C° között tartjuk. A p-nitro-benzoil-kloridot általában 1,5-10 mólarányban használjuk a cefalosporin C 1 móljára vonatkoztatva. 10 Ezután további savhozzáadással a pH-t 4,5 - 5-re állítjuk be és a fermentlevet vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, mint például metil-izobutil-ketonnal, etil-acetáttal, propil-acetáttal és butil-acetáttal extraháljuk a szennyezések eltávolítása 15 céljából. A vizes fázist híg ásványi savval pH 2-ig megsavanyítjuk, majd szerves oldószerrel, például metil-izobutil-ketonnal, butanollal, etil-acetáttal stb. extraháljuk. A derítőszénnel átszűrt szerves fázist ezután megszárítjuk, kis térfogatra bepároljuk és 20 alkálifém- vagy amin-kation képzésére képes reagenssel kezeljük, előnyösen nátrium-etil-hexanoátot vagy tercier amint, mint N,N-dimetil-benzil-amint használunk. A lehűléskor kiváló csapadék a cefalosporin C p-nitro-benzoátjának nátrium- vagy N,N-di-25 metil-benzil-amin-sója. Bár sok esetben nem feltétlenül szükséges, hogy a termék tisztasági foka már ekkor kielégítő legyen, szerves oldószerből, mint például kisszénatomszámú alkanolokból vagy kisszénatomszámú alkanolok elegyéből való egyszerű 30 átkristályosítás nagy tisztaságú terméket eredményez, amely magas kitermeléssel közvetlenül átalakítható 7-amino-cefalosporánsawá. íjgy is eljárhatunk, hogy a kis térfogatra 35 bepárolt oldatot lehűtjük és kisszénatomszámú alkil-éterek hozzáadásával a szabad savat csápjuk ki. A 7-amino-cefalosporánsawá való átalakításhoz szokásos és ismert módszereket alkalmazunk. így 40 az átalakítás jó hatásfokkal hajtható végre a 3 575 970 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalom leírása alapján. A következő példák részletesen leírják a találmány szerinti eljárást, anélkül, hogy oltalmi körét 45 korlátoznák. 1. példa 50 62 g cefalosporin C-t tartalmazó 25 liter fermentlevet 15térf% acetonnal hügítunk és 5-10 C°-ra lehűtünk. Az elegy pH-ját 10% nátrium-hidroxid-oldattal 7,5-re állítjuk be és lassan, keverés közben 100 ml acetonban oldott 55 g p-nitro-ben-55 zoil-kloridot adunk hozzá. A hozzáadás alatt híg nátrium-hidroxiddal vagy -karbonáttal a pH-t 7,5 — 8 között tartjuk. A hozzáadás befejezése után az elegyet 10 C°-on addig hagyjuk állni, amíg a pH-érték állandósul. Ezután híg kénsawal pH 6-ig 60 megsayanyítjuk és az acetont szobahőmérsékleten, vákuumban ledesztilláljuk. A pH-t további kénsav-hozzáadással 4,5-re állítjuk be, majd az elegyet 1/4 térfogat metil-izobutil-ketonnal háromszor extraháljuk. A szerves kivonatokat elöntjük, a vizes fázist 65 pedig híg kénsawal pH 2-ig megsavanyítjuk és 2