169074. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 15-hidroxi- prosztaglandin-dehidrogenáz tisztítással egybekötött kinyerésére tüdőkivonatokból

MAGTAB NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY 169074 jÉfa Nemzetközi osztályozás: fgf Bejelentés napja: 1974. IX. 26. (GO-1290) C 07 G 7/026 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1976. IV. 28. Megjelent: 1977. VI. 30. r Feltalálók: dr. Tolnay Pál oki. vegyészmérnök 25%, Divald András biológus 25%, dr. Cseh György orvos 25%, Kovácsné dr. Szabó Ilona gyógyszerész 17%, Kaufer László vegyésztechnikus 8%, Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás 15-hidroxi-prosztaglandin-dehidrogenáz tisztítással egybekötött kinyerésére tüdőkivonatokból 1 A találmány tárgya új eljárás 15-hidroxi-prosztaglandin-dehidrogenáz tisztítással egybekötött kinyerésére tüdőkivonatokból. Ismeretes, hogy több szerv, így különösen a tüdő tartalmaz 15-hidroxi-prosztaglandin-dehidro- 5 genázt, amely egyes prosztaglandinok lebontásában a kérdéses szervben kulcsszerepet játszik. A 15-hidroxi-prosztaglandin-dehidrogenáz a megfelelő prosztaglandinok 15-ös helyzetű hidroxi-csoportját nikotinsavamid-adenin-dinukleotid közreműködé- 10 sével ketocsoporttá oxidálja, amennyiben a kérdéses hidroxi-csoport S-konfigurációjú. Ezen fajlagos hatása révén a 15-hidroxi-prosztaglandin-dehidrogenáz előnyösen használható fel egyes prosztaglandinok enzimes meghatározására prosztag- 15 landin-tartalmú készítményekben és biológiai anyagokban, továbbá a megfelelő 15-keto-prosztaglandinok előállítására enzimes úton. Az erre használt 15 -hidroxi-prosztaglandin-dehidrogenáz-készítménynek kellő aktivitással, tisztasággal és stabilitással 20 kell rendelkeznie. Több eljárás ismeretes a 15 hidroxi-prosztaglandin-dehidrogenáz tisztítással egybekötött kinyerésére tüdőkivonatokból. így elsőként Anggard és 25 Samuelsson közöltek eljárást [Ark. Kemi 25, 293 (1966), Methods Enzymol. 14, 215 (1969)] az enzim tisztítására. Ennél a sertéstüdő felaprítása és az enyhén lúgos pufferrel végzett kivonás után a sejttörmeléket nagysebességű centrifugálással kiüle- 30 pitik, a fehérjéket ammóniumszulfátos kisózással frakcionálják, majd ezt követően több oszlopkromatográfiás lépéssel végzik a tisztítást (cellulóz-származékokon, dextrángéleken, hidroxil-apatiton). Később (Methoden der Enzymatischen Analyse, szerk. H. U. Bergmyer, 2. kiadás, 1970., 1821. oldal) preparatív gél-elektroforézises lépést is beiktattak. Lényegileg hasonló eljárást használnak Marrazzi és Matschinsky [Prostaglandins 1, 379 (1972)], Ohno és társai [Yakugaku Zasshi 92, 1111 (1972)] sertéstüdőből kiindulva a 15-hidroxi-prosztaglandin-dehidrogenáz kinyerésére és tisztítására, azzal az eltéréssel, hogy az ammóniumszulfátos kisózásos fehérje-frakcionálás után a kromatográfiás lépések sorrendje, száma és kiviteli módja különböző lehet. A fentiekben ismertetett eljárások több hátrányt mutatnak, főleg a kezdeti tisztítási műveleteket illetően. Az ismert eljárások legfőbb hátránya az, hogy az egyes lépések nem eléggé szelektívek, és az elért tisztítási fok is csekély. így Anggard és Samuelsson eljárása szerint az ammóniumszulfátos kisózásos frakcionálás után a termék fajlagos aktivitása 1,8 E/mg, az összes termelés 2370 E/kg tüdő, Marrazzi és Matschinsky pedig 0,51 E/mg fajlagos aktivitást és 7600 E/kg tüdő termelést közöltek. Ezenkívül nagyobb léptékű előállítás esetén a tüdőkivonat nagysebességű centrifugálást (45 000 - 50 000 g értéken) igen nehézkes megvalósítani. 169074