169032. lajstromszámú szabadalom • Eljárás O-szubsztituált 7béta-amino-3-cefem-3-ol-4-karbonsav- származékok előállítására
41 169032 42 ultraibolya abszorpciós spektrum (95%-os vizes , etanolban): XBtx = 288 mu (e = 3610) és XváH = 247mjU, infravörös abszorpciós spektrum (metilén-klorid- 5 ban): jellemző sávok 2,94 ju, 3,95 ß, 5,81 ju, 5,95 ß, 6,22 ju és 6,61 ß. Kitermelés: 0,173 g. A kiindulási anyagot a következő módon állítjuk elő: 10 11,82 g 3-hidroxi-metil-7/3-fenil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav nyers nátriumsójának (a 3-acetil- o xi -me til -7/3-fenü-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav nátriumsójának, Bacillus suptilis ATCC 6633 törzs 15 tisztított extraktumával végzett enzimatikus dezacilezésével, és a reakcióelegy ezt követő liofilizálásával állítjuk elő) és 200 ml víz oldata fölé 400 ml etil-acetátot rétegzünk és tömény vizes foszforsavval 2 pH-ra megsavanyítjuk. A vizes fázist elválaszt- 20 juk és kétszer egyenként 150 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves extraktumokat négyszer egyenként 50 ml vízzel mossuk és magnézium-szulfáton szárítjuk, majd mintegy 400ml-re betöményítjük. Az oldathoz feleslegben difenil-diazo- 25 -metánt adunk, 3 óra hosszat szobahőmérsékleten állni hagyjuk és a szemcsés, kristályos csapadékot szűrjük. A szűrletet 200ml-re betöményítjük, melegen ciklohexánt adunk hozzá, majd szobahőmérsékletre való lehűlés után egy ideig körülbelül 3° 4C°on állni hagyjuk. A csapadékot leszűrjük és aceton és ciklohexán elegyből átkristályosítjuk, és így 3-hidroxi-metil-7/?-fenil-acetil-amino-3-cefem-4--karbonsav-difenil-metil-észtert kapunk. 35 Olvadáspont: 176-176,5 C°, [a]l° = -6° ± 1° (c = 1,231% kloroformban), vékonyréteg-kromatogram (szilikagél, kimutatás jódgőzzel vagy ultraibolya fénnyel X254 mju: 40 Rf = 0,42 (rendszer: kloroform és aceton 4:1), Rf = 0,43 (rendszer: toluol és aceton 2 : 1), és Rf = 0,41 (rendszer: metilén-klorid és aceton 6:1). Nitrogénatmoszférában 1,03 g 3-hidroxi-metil-70- 45 -fenil-acetü-amino-3-cefem-4-karbonsäv-difenil-metil-észtert és 1,05 g N-metil-N,N'-diciklohexil-karbodiimidium-jodidot 25 ml abszolút tetrahidrofuránban oldunk és 1 óra hosszat 35 C°-on melegítünk. A reakcióelegyhez ezután 15 ml abszolút tetrahid- 50 rofuránban 1,05 g N-metü-N,N'-diciklohexil-karbodiimidium'jodidot ismét hozzáadunk, és 17 óra hosszat szobahőmérsékleten és nitrogénatmoszférában állni hagyjuk. A reakcióelegyről az oldószert forgó bepárlóban és csökkentett nyomáson ledesz- 55 tilláljuk. A maradékot metilén-kloridban felvesszük és 50 g szilikagéllel (10% vizet hozzáadva) töltött oszlopon leszűrjük, majd 4 részletben, egyenként 100 ml metilén-kloriddal mossuk. Az eluátumot kis térfogatra bepároljuk és egy szilikagéllel töltött 60 oszlopon (90 g, 10% desztillált víz hozzáadásával dezaktivált) kromatografáljuk, majd összesen 900 ml 3 :7 arányú toluol és metilén-klorid elegygyel a nem poláris szennyezéseket eluáljuk. Kétszer 200 ml metilén-kloriddal eluálva a 3-jód-metil-7/3-fe- 65 nü-acetü-amino-3-'cefem-4-karbonsav-difenil-metil-észtert kapjuk, a vékonyréteg-kromatográfiailag egységes frakciókat benzolból liofilizáljuk. Infravörös abszorpciós spektrum (metilén-kloridban): jellemző sávok 3,00 ju, 5,62 ß, 5,82 JU, 5,95 ju, 6,70 M, 7,32 ju és 8,16 ju. Az előbbiekben alkalmazott jódozó reagenst a következő módon állítjuk elő: mágneses keverővel, visszafolyató hűtővel és nitrogénátvezetéssel ellátott 250 ml-es gömblombikban 42 g frissen desztillált N,N'-diciklohexil-karbodiimídet 90 ml metil-jodidban, nitrogénatmoszférában, szobahőmérsékleten oldunk, majd a színtelen reakcióelegyet 70 C°-os vízfürdő hőmérsékletén 72 óra hosszat keverjük. A reakció befejezése után a vörösbarna oldatból a felesleges metil-jodidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a sűrűnfolyós, vörösbarna maradékot 150 ml abszolút toluolban 40C°-on oldjuk. A néhány órán belül kikristályosodó kristálymasszát üvegnuccson, levegő kizárásával, nitrogénatmoszférában szűrjük, a lombikot háromszor 25 ml abszolút, jéggel lehűtött toluollal kiöblítjük, és ugyanennyi toluolt használunk az üvegnuccson levő, gyengén sárgás kristálymassza színtelenre való mosására. Szobahőmérsékleten 20 óra hosszat és 0,1 Hgmm nyomáson végzett szárítással az N-metil-N,N'-diciklohexil-karbodiimidium-jodidot színtelen kristályos formában kapjuk. Olvadáspont: 111—113 C°, infravörös abszorpciós spektrum (kloroformban): jellemző sávok 4,72 ß és 6,00 ß. 0,400 g 3-jód-metil-7j3-fenil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav: difenil-metil-észter és 15 ml 90%-os vizes ecetsav oldatát jéggel 0 C°-ra hűtjük, melyhez erős keverés közben részletekben 2,0 g cinkport adunk. A reakcióelegyet 0C°-on 30 percig keverjük, majd a nem reagált cinkport szűrőnuccsra rétegzett diatomaföldön leszűrjük, a szűrési maradékot többször friss metilén-kloridban szuszpendáljuk és ismét szűrjük. Az egyesített szűrleteket csökkentett nyomáson betöményítjük, abszolút toluolt adunk a maradékhoz és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot keverés közben 50 ml metilén-kloridban és 30 ml 0,5 mólos vizes dikálium-hidrogén-foszfát oldatban felvesszük, a vizes fázist elválasztjuk, kétszer 30 ml metilén-kloriddal extraháljuk, majd elöntjük. A szerves extraktumot többször, telített, vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot 22 g szilikagéllel (10% víz hozzáadásával) töltött oszlopon kromatografáljuk. A 3-metilén-7/J-fenil-acetil-ami o-cefam-4a-karbonsav-difenil-metil- észtert metilénkloriddal és 2% metil-acetátot tartalmazó metilén-kloriddal eluáljuk, majd metilén-klorid és hexán elegyéből átkristályosítjuk. Olvadáspont: 144-147 C°, WD° = -18° ± 1° (c = 0,715 kloroformban), ultraibolya abszorpciós spektrum (95%-os vizes etanolban): 21
