169022. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kopolimer hordozóra felvitt vízoldhatatlan fehérje-készítmények előállítására
15 169022 16 4 a) példa 2100g tetraetilénglikol-dimetakrilát, 600 g metakrilsav, 300 g maleinsavanhidrid és 30 g azo-izovajsavnitril 7,5 liter acetonitrilben készült oldatát 150 g glicerin mono- és -dioleátot tartalmazó 21 liter 100-140 C° forrásponthatárú benzinben szuszpendáljuk és 1 óra hosszat 50 C°-on, majd 20 óra hosszat 60 C°-on polimerizálunk. A kapott gyöngypolimert leszívatjuk, kétszer toluollal és egyszer 30-50 C° forrásponthatárú petroléterrel keverjük, majd 60 C°-on szárítjuk. Hozam: 2,95 kg Térfogatsúly: 4,7 ml/g Duzzadási térfogat vízben: 5,4 ml/g Átlagos részecskeátmérő: kb. 0,3 mm Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után = 4,0 milliekvivalens/g. 4 b) példa 1 g 4 a) példa szerint előállított polimert az 1 b) példával analóg módon penicillin-acilázzal 33 ml vízben 6,3 pH-értéken reagáltatunk. Eredmény: Enzimatikus aktivitás (NIPAB-teszt): Kiindulási oldat: 107 U Felülúszó rész és mosóoldatok: 27 U Hordozógyanta a reakció után: 67 U, vagyis a kiindulási aktivitás 63%-a. 4 c) példa 20 g 4 a) példa szerint előállított polimert szobahőmérsékleten 600 ml sertéspankreasból készült 1.0 g nem specifikált elasztáz-oldatba keverés közben beviszünk. Eközben 5,8 állandó pH-értéket tartunk fenn. 16 órás reakcióidő után a gyantát les/ívatjuk és az l.b) példában leírt módon feldolgozzuk. Eredmény: Enzimatikus aktivitás (kazein-teszt): Kiindulási oldat: 2180'E Felülúszö rész és mosóoldatok: 993 E Hordozógyanta a reakció után: 1225 E, vagyis a kiindulási aktivitás 56%-a. A nem specifikált elasztáz enzimatikus aktivitását titrimetriás úton kazein-szubsztrátummal (koncentrációja 11,9 mg/ml) 8 pH-értéken 25 C°-on határozzuk meg. 1 egység (E) megfelel 1 percre számítva 1 mikromól káliumhidroxid fogyasztásnak. 5 a) példa 80 g tetraetilénglikol-dimetakrilát, 10 g metakrilsav és 10 g maleinsavanhidrid, végül lg azo-izovaj-5 savnitril 300 ml acetonitrilben készült oldatát a 3 a) példával azonos módon polimerizáljuk. Hozam: 92 g fehér, tojás alakú részecskék Térfogatsúly: 2,5 ml/g Duzzadási térfogat vízben: 3,2 ml/g 10 Fajlagos felület: 1,7 m2 /g Átlagos részecskeátmérő: 125 ß Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után =3,5 milliekvivalens/g. 5 b) példa 1 g 5 a) példa szerint előállított polimert az 1 b) példával analóg módon 33 ml vízben 6,3 pH-érté-20 ken penicillin-acilázzal reagáltatunk. Eredmény: Enzimatikus aktivitás (NIPAB-teszt): 25 Kiindulási oldat: 118 U Felülúszó rész és mosóoldatok: 34 U Hordozógyanta a reakció után: 61 U, vagyis a kiindulási aktivitás 52%-a. 6 a) példa 50 g etilénglikol-dimetakrilát, 40 g metakrilsav, 35 10 g maleinsavanhidrid és lg azo-izovaj savnitril 300 ml acetonitrilben készült oldatát 5 g glicerin-rnonooleátot és -dioleátot oldott állapotban tartalmazó 100—140 C° forrásponthatárú 1 liter benzinben szuszpendáljuk és 20 óra hosszat 60 C°-on 40 polimerizáljuk. A gyöngypolimereket leszűrjük, háromszor benzolban és kétszer 30—50 C° forrásponthatárú petroléterben szuszpendáljuk, majd vákuumban 50C°-on szárítjuk. Hozam: 87 g 45 Térfogatsúly: 4,8 ml/g Duzzadási térfogat vízben: 5,6 ml/g Fajlagos felület: 13,2 m2 /g Savtartalom az anhidrid-csoportok elszappanosítása után = 4,2 milliekvivalens/g. 6 b) példa 1 g 6 a) példa szerint előállított polimert az 1 b) 55 példával analóg módon 33 ml vízben 6,3 pH-értéken penicillin-acilázzal reagáltatunk. Eredmény: 60 Enzimatikus aktivitás (NIPAB-teszt): Kiindulási oldat: 118 U Felülúszó rész és mosóoldatok: 29 U Hordozógyanta a reakció után: 55 U, 65 vagyis a kiindulási aktivitás 47%-a. 8
