168994. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pszeudo-di- és triszacharidok előállítására
27 168994 28 11. példa 500 mg 0-[3,4-Di-0-acetil-6-azido-2,6-didezoxi-2--oximio-a-D-glukopiranozil-(l->4)]-5,2',4'-tri-0-acetil-l,3,3'-tri-N-karbobenzoxi-garaminnak 7 ml jég- 5 ecettel készült oldatához hozzáadunk 1 g levilinsavat és 1 ml n sósavat, és a keveréket 25°-on 18 óra: hosszat keverjük. Ezután metilénkloridot adunk hozzá, és a metilénkloridos oldatot vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, magné- 10 ziumszulfáton szárítjuk és bepároljuk. A száraz maradékot lml vizet tartalmazó 10 ml dioxánban oldjuk, és az oldatot 5°-ra hűtjük. Hozzácsepegtetjük 100 mg nátriumborhidridnek 2 ml dioxán és 4 ml víz elegyével készült oldatát, és 5°-on fél óra 15 hosszat és 25°-on egy óra hosszat keverjük. A reakciót ecetsavval megállítjuk, és a keveréket bepároljuk. A száraz maradékhoz 40 ml metanolt adunk, és 10%-os palládium-szén jelenlétében 4,2 att nyomáson 25° -on 19 óra hosszat hidrogé- 20 nézzük. Ezután a katalizátort kiszűrjük, a szüredéket bepároljuk, a száraz maradékhoz 40 ml 1 :2 arányú metanol-tömény vizes ammónia elegyet idunk, és bombában 100°-on 16 óra hosszat melegítjük. Ezután az oldatot bepároljuk, és az üveges 25 terméket 30 ml 5%-os nátriumhidroxid-oldatban 16 óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk. Lehűlés után Amberlite IRC 50 gyantával közömbösítjük, és a zagyot egy oszlopra öntjük. A gyantát vízzel mossuk, és az antibiotikumot egy liter 1,5 n 30 vizes ammóniával eluáljuk. A bázisos eluátumot bepároljuk, és a száraz maradékot 110 cm magas és 2,5 cm átmérőjű kovasavgéloszlopon kromatografáljuk, eluensként 1:1:1 arányú kloroform-metanol-ammónia-oldat alsó fázisát használva. így 40 mg 35 gentamicin B-t kapunk színtelen amorf termék alakjában, miután az eluátumot átbocsátjuk Amberlite IR 401S gyantán, és liofilizáltuk. Az etanolos szolvát 157-159°-on olvad. Elemi összetétel (%): a C19 H 3 8N 4 Oio ' C 2 H s OH 40 képlet alapján 45 m/e 483.26665 (M+ +l, C 19 H 39 N 4 Oi 0 képletnek megfelel m/e 483.26661), [aß 6 +175,2° (vízben), 50 ymax (KCl): 3300, 1050 cm-1, 5 (D2 0): 1,22 (3H, szingulett, 4"-CH 3 ), 1,23 (1H, kvadruplett, J = 12 Hz, H2ax ), 1,98 (1H, dublettek, J = 3,75 Hz, J = 12,5 Hz, H2e q), 2,52 (3H, szingulett, 3"-NCH3 ), 4,04 (1H, dublett. 55 1=12,5 Hz, Hs "eq), 5,07 (1H, dublett, J = 4Hz Hj") és 5,31 ppm (1H, dublett, J = 3,5 Hz, Hí >), [0]2 9o -6830 (TACu). számítva: C =47,70, N = 10,60, H =8,41, talált: C =47,78, N = 10,59. H =8,38, 60 12. példa 3g 0-[4-0-acetil-2,3-didezoxi-2-oximino-6-0-tözil--a-D-glukopiranozil-íl^j-S^'^'-tri-Ö-acetill.S.S'-* ° -tri-N-karbobenzoxi-garamint feloldunk 75 ml jég- 65 ecetben. Az oldathoz hozzáadunk 7,5 ml levulinsavat és 10 ml n sósavat, és 20 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk. Ezután a reakciókeverékhez 700 ml metilénkloridot adunk, 3 adag 5%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal extraháljuk, és vízzel mossuk. Az oldószert elpárologtatjuk, a maradékhoz 100 ml dioxánt és 10 ml vizet adunk, és az oldatot 5°-ra hűtjük. Ezután keverés közben hozzácsepegtetjük 2 g nátriumborhidridnek 40 ml víz és 20 ml dioxán elegyével készült 5°-os oldatát, és a keverést 5° -on egy óra hosszat folytatjuk. A nátriumbórhidrid feleslegét ecetsav hozzácsepegtetésével elbontjuk, és a kapott oldatot bepároljuk. így O - [ 4 - O -a c e t il-3-dezoxi-6-0-tozil~a-D-glukopiranozil-(1 -*4) ]-5,2',4'-tri-0-acetil-1,3,3'-tri-N-karbobenzoxi-garamint kapunk. Az így kapott 150 mg terméket 40 ml ammóniával telített 0°-os metanolban oldjuk, és bombában 16 óra hosszat 100°-on melegítjük. Az oldatot ezután bepároljuk, és a maradékhoz 50 ml 5%-os vizes nátriumhidroxid-oldatot adunk, és 16 óra hosszat visszafolyatás közben forraljuk. Ezután a reakciókeveréket Amberlite IRC 50 gyantával közömbösítjük, a gyantát egy oszlopra visszük, és egy liter vízzel mossuk. A gyantáról antibiotikumot 1,5 liter 1,5 n vizes ammóniaoldattal eluáljuk, az eluátumot bepároljuk, és a maradékot 160 cm magas és 2,5 cm átmérőjű kovasavgéloszlopon kromatografáljuk, eluensként 1:2:1 arányú kloroform-metanol-7%-os ammóniumhidroxid keveréket használva, majd ismét kromatografáljuk egy 110 cm magas és 2,5 cm átmérőjű kovasavgéloszlopon, eluensként 1:1:1 arányú kloroform-metanol-ammóniumhidroxid-keverék alsó fázisát használva. Az eluátumot Amberlite IR 40IS gyantán átbocsátva és liofilizálva színtelen termékként 9 mg 3'-dezoxi-gentamicin-B-t kapunk. m/e 467 (M + 1), C19 H 3 8N 4 0 9 képletnek megfelel m/e 467 (M+ +1), 6 (D2 0 + DC1) 1,30 (3H, szingulett, 4"-CH 3 ), 2,89 (3H, szingulett, 3"-NCH3 ), 5,08 (1H, dublett, Jj", 2 "= 3,5 Hz, HÍ") és 5,41 ppm (1H, dublett, Ji', 2'=4 Hz, H!')-13. példa 2,5 g 0-[4-0-acetil-3-dezoxi-6-0-tozil-a-D-glukopiranozil-(l-*4)]-5,2',4'-tri-0-acetil-l,3,3'-tri-karbobenzoxi-garamint feloldunk 25 ml száraz piridinben, és az oldathoz hozzáadunk 2,3 ml ecetsavanhidridet, és 18 óra hosszat 25°-on állni hagyj Jc. A reakciókeveréket vízbe öntjük, a kiyálf csapadékot szűrőn elválasztjuk, és szárítjuk.' Az így kapott 2,5 g acetátot és 2,8ig nátriumazidot feloldjuk 90 ml hexametilfoszioramicíban, és az oldatot 65 óra hosszat 25°-on keverjük. Ezután vízbe . öntjük, a kéveréke-t éterrel extraháljuk, a kivonatot magnéziumszulfáton szántjuk, és bepárolva az azidot kapjuk, színtelen amorf termék alakjában. Ezt metanolban oldjuk, és *10%-os paUádiurr -szénen 4,2 att nyomáson 25°-on 19 óra hosszat hidrogénezzük. A katalizátort kiszűrjük, és a szüredéket bepároljuk. A visszamaradt üveges anyagot 100 ml 5%-os vizes nátriumhidroxid-oldatban visszafolyatás 14
