168968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nukleozid-di- és -trifoszfánok tiofoszfátanalógjainak előállítására
7 168968 8 A vegyület 3 ' P-NMR-spektruma, a vizsgálatot 8. példa D20-ban, kb. 10-es pH-értéknél végezve: 6 = -33,3 ppm(d), + 11,0 ppm(d), + 22,8 ppm(t), összehasonlításképpen az ATP vizsgálati eredményei: 6 = + 5,08 ppm(t), + 10,64 ppm (d) és 20,94 ppm(d). 5. példa [Adenozin-5'-0-)2-tiodifoszfát)-diszulfid-trietilammóniumsó]. 6 (imól adenozin-5'-0-(2-tiodifoszfát)-trietilammóniumsót 0,8 ml vízben 0,1 ml 3%-os hidrogénperoxid-oldattal kezelünk és az elegyet azonnal szárazra pároljuk. A maradékhoz 1 ml vizet adunk és bepároljuk. Ezt a műveletet a H2 0 2 -nyomok eltávolítása céljából háromszor megismételjük. A termék kvantitatíve diszulfiddá alakul. 10 [Uridin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-trietilammóniumsó] A 3. példában ismertetettek szerint járunk el, de 0,25 mmól adenozin-5'-difoszfát-származék helyett 0,25 mmól uridin-5'-difoszfát[mono-(tri-n-oktalammónium)-mono-(tri-n-butilammónium]-sót alkalmazunk. A keletkezett uridin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-trietilammóniumsó hozama körülbelül 10% termék uridin-spektruma «H^O^oAn (e= 100 000). 15 20 * max' = 260 nm 9. példa [Citidin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-trietilammóniumsó] 6. példa A 3. példát oly módon megismételve, hogy adenozin-5'-difoszfát-származék helyett 0,25 mmól citidin-5'-difoszfát-származékot alkalmazva citidin-5 '-0-(3-tiotrifoszfát)-trietilammóniumsót kapunk. 25 Hozam: mintegy 12%. A termék uridin-spektruma 5 Six = 270 nm (e = 8000). [Adenozin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-diszulfid' -trietilammóniumsó] Adenozin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-trietilammóniumsót a 4. példa szerint adenozin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-diszulfid-trietilammóniumsóvá oxidálunk. A hozam 50%. A termék adenozin-spektruma: X"2 0 = 259nm (e = 30 000). A vegyület 31 P-NMR-spektruma, a vizsgálatot D2 O-ban, kb. 10-es pH-értéknél végezve: 5 = -33,3 ppm(d), + 11,0 ppm(d), = 22,8 ppm(t), összehasonlításképpen az ATP vizsgálati eredményei: 6 = +5,08 ppm(t), +10,64 ppm(d) és 20,94 ppm(d). 30 10. példa 35 40 [2'-Deoxi-adenozin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-trietilammóniumsó ] A 3. példát megismételjük, de adenozin-5'-difoszfát-származék helyett 0,25 mmól 2'-deoxi-adenozin 5'-difoszfát-származékot alkalmazunk. Körülbelül 10%-os hozammal 2'-deoxi-adenozin-5 '-0-(3-tiotrifoszfát)-trietilammóniumsó keletkezik, melynek adenozin-spektruma X „Ix = 259 nm (e = 15 000). 45 A példákban ismertetett vegyületek Rf-értékeit a következő vizsgálattal kapjuk: 7. példa [Adenozin-5'-0<3-tiotrifoszfát)-diszulfid-trietilammóniumsó] 50 A den o z in - 5 '-0-(3-tiotrifo szf át)-trietilammóniumsót az 5. példa szerint adenozin-5'-0-(3-tiotrifoszfát)-diszulfíd-trietilammóniumsóvá hozam 90%. oxidálunk. A 55 Az 1—7. példák szerinti eljárásokat ismételjük, de azadenozin-vegyület helyett mindenkor a megfelelő guanozin-, inozin-, citidin-, uridin-, timidin-, 5-metilcitozin- vagy 5-hidroxi-metilcitozin-vegyületet alkalmazzuk. Hasonlóképpen használjuk a megfelelő dezoxivegyületeket. A reakciók minden esetben azonos módon, hasonló kitermeléssel mennek végbe. 60 65 A Macherey et Nagel, Düren cég által forgalomba hozott Polygram CEL 300PEI/UV254 megjelölésű cellulózlemezek ún. start vonalára felvisszük az illető vegyület vizes oldatát, majd 0,75 mólos KH2 P0 4 -tal (pH = 3,5) a szokásos módon vándoroltatjuk. A vándorlási szakasz ismert standard körülmények közötti meghatározásával a következő értékeket kapjuk: 11. példa [Adenozin-5'-0-(2-tiodifoszfát)] A d e nozin- 5 '-0-(2-tiodifoszfát)-trietilammóniumsó 0,5 mmólos mennyiségét vízben oldjuk, majd az oldathoz kis feleslegben 2 n sósavoldatot adunk. A vegyület adenozin-spektruma: X H2 O _ 259 nm (e=15 000). max
