168849. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glükoprotein-elegy előállítására

3 168849 4 törzsekből, vagy az ezek elegyéből készített tenyészet extrahálásával nyert glükoprotein-elegyből. Az eljárást oly módon végezzük, hogy a kiindulási glükoprotein-elegyet vizes oldatban egy vagy ugyanabban az oldatban egymást követően több 5 kalibrált membránt alkalmazva dialízisnek vetjük alá, a membránon visszatartott oldatot elkülönítjük, majd az elkülönített oldatot hidrofil polimer-géloszlopra felvisszük, és a tisztított glükoprotein-elegyet tartalmazó meg nem kötött frakciót fel- 10 fogjuk. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy a segítségével előállított glükoprotein-elegy hatásosabb, mint a 162 857 számú magyar szabadalmi leírás szerint előállított glükoprotein-elegy. 15 A találmány szerint és a fent említett szabadalmi leírás szerint előállított glükoproteineket összehasonlítva azt találjuk, hogy a találmány szerinti termék kétszer olyan hatásos, mint a szabadalmi leírás szerint kapott termék. A vizsgálati 20 eredményeket a következő táblázat foglalja össze: Gyulladásgátló anyagok 40% hatásos dózis mg/kg 25 Indomethacin 2 Delta-cortison 5 Fenilbutazon 50 30 Glükoprotein-elegy (a 162 857 számú magyar szabadalmi leírás szerint előállítva) 0,05 35 Glüko protein-elegy (a találmány szerint előállítva) 0,025 A gyulladásgátló hatás vizsgálatát gyulladást 40 keltő anyagokkal létrehozott ödéma esetében végeztük. A vizsgálati anyagot intraperitoneálisan adtuk be egy órával a gyulladáskeltő anyag beadása előtt, A hatásos dózist mg/kg-ban adjuk meg. A 40%-os 45 hatásos dózis azt a dózist jelenti, amely az ödéma 40%-os csökkenését eredményezi a kezeletlen állatokon észlelt ödémához viszonyítva. A vizsgálatok során a glükoproteinek, különösen 50 a találmány szerinti eljárással előállított glükoproteinek, kedvező gyulladásgátló hatást mutattak. A glükoproteinek alkalmazása során fekély képződését nem észleltük. A találmány szerinti glükoprotein-elegy antibak- 55 tériális hatását vizsgálva azt találtuk, hogy a termék hatásos Gram pozitív és Gram negatív mikroorganizmusokkal szemben. A hatás inkább preventív, mintsem kurativ. A glükoprotein-elegyet egereknek adjuk be, 60 majd mikroorganizmusokat injektálunk. A vizsgálatokat Klebsiella pneumoniae-val végezve azt találjuk, hogy a készítményt 1 g/kg dózisban alkalmazva 90%-os védelmet kapunk Klebsiella pneumoniaeval szemben. Staphylococcus-szal szemben 65 lg/kg-os dózis mellett a védőhatás 30%-os, 20 g/kg-os dózis alkalmazása esetén a hatás 77%-os. A hatás függ a glükoproteinek beadásának idejétől is. A Klebsiella pneumoniae-való fertőzést megelőző 48 órában adva be a készítményt 100%-os védelmet kapunk, ha a készítményt a fertőzés időpontjában, vagy 48 órával utána adjuk be, a hatás 55, illetőleg 10%-os. Ezek az eredmények a glükoproteinek preventív hatását igazolják. A találmány szerinti eljáráshoz a Pneumococcus, Streptococcus, Neisseria, Micrococcus, Staphylococcus, Klebsiella pneumoniae és Haemophilus influenzae törzseket alkalmazzuk, külön-külön vagy több törzset együtt, majd a glükoprotein-elegyet dialízisnek vetjük alá vizes oldatban. Ehhez kalibrált membránokat alkalmazunk, amelyek molekulaszűrőként szerepelnek. Az inaktív vagy kismértékben aktív frakciókat membrán segítségével különítjük el, a membrán által visszatartott tiszta frakciót polimerizált hidrofilgélen kromatografáljuk, majd a géloszlopon meg nem kötött frakciót felfogjuk. Az eljárás lehetővé teszi, hogy a glüko protein-elegyet igen tiszta és következésképpen igen hatásos formában különítsük el. Az eljárás során a fehérje bomlástermékek legnagyobb részét eltávolítjuk, ennek következtében a végterméket igen tiszta formában kapjuk. Az eljárás főbb jellemzői: 1) Szelektív áteresztő membránként a 960 000 mólsúlyú vegyületeket visszatartó AMICON XM 300-at (Amicon Corp. Lexington - Mass. USA) alkalmazunk. 2) Szelektív áteresztő membránként AMICON XM 50, PM 30 és UM 2-t alkalmazunk. 3) Hidrofil polimer gélként Szefaróz gélt (68) alkalmazunk. (Előállítja: Pharmacia Fine Chemicals.) 4) Hidrofil polimer gélként Szefadex gélt (G 200) alkalmazunk. (Előállítja: Pharmacia Fine Chemicals.) A találmány szerinti eljárással előállított glükoproteineket molekulasúlyukkal hexóz-tartalmukkal és a hexóz-tartalom/fehérje-tartalom arányával jellemezhetjük. Az eljárás szerint előállított igen tiszta glükoprotein-elegy molekulasúlya 1 millió, vagy ennél nagyobb, 60-65% hexóz-tartalommal rendelkezik és a hexóz/fehérje arány megközelítőleg 7. Általában mintegy 62% hexózt tartalmaz, minthogy a cukor-tartalom meghatározása nehézségeket okoz, ennek értéke 60 és 65% között mozoghat anélkül, hogy ez a frakció tisztaságára vonatkozólag bármilyen kihatással lenne. A találmány szerint előállított glükoprotein-elegyek hatásos gyulladásgátlók, és a mikroorganizmusokkal szemben stimuláló anyagok. Különösen eredményesen alkalmazhatók bronchitisz, mikróbás fertőzés, csont- és ízületi gyulladás esetében. A glükoprotein-elegyek különféle gyógyszerkészítményekben parenterális, perlingvális, orális, rektális vagy helyi alkalmazást nyerhetnek. Injekcióként vagy szuszpenzióként ampulában vagy 2