168778. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gentamicin-tipusú antibiotikumok előállítására
3 168778 4 romszámú magyar szabadalmi leírás bármely gentamicint termelő törzs tenyésztésével kapott fermentlé feldolgozására ad módszert. Az eljárás azonban csak a C-komponensek izolálására ad ismertetést. Ismeretes ugyanis az is, hogy egyes gentamicint termelő mikroorganizmusok, mint a Micromonospora echinospora var. pallida, ill. Micromonosporaferrugineaés a Micromonospora purpurea a gentamicin-C mellett még két további antibiotikumot, a BA-3(A)-t és Ba-3(B)-t is termelnek (3 091 572 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). A legutóbbi időkben kimutatták (2 130 103 sz. német szövetségi köztársaságbeli nyilvánosságrahozatali irat, valamint a 71/4013 sz. délafrikai szabadalmi leírás), hogy ezek az antibiotikumok nem egységesek, hanem összesen 4 antibiotikumra, gentamicin-A-ra, -B-re, -B,-re és X-re választhatók szét. Azonban az elkülönítésre használt kromatográfiás módszerben az elválasztás hatásfoka igen rossz, az egyes komponenseknek csak töredék mennyiségét kapják meg tiszta állapotban. A sziszomicin (rickamicin, dehidrogentamicin-Cla , antibiotikum 6640) a gentamicin-C-hez hasonló antibiotikum, mely a gentamicin-C-nél is hatékonyabbnak bizonyult egyes Pseudomonas-fajok által okozott fertőzések esetében. A sziszomicint a szakirodalom szerint a Micromonospora inoyaensis termeli (1 932 309 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírás). E törzs a sziszomicinen kívül egyéb antibiotikumot, így gentamicin-C-t nem termel. A 787 758 sz. belga szabadalmi leírás, valamint a 167 528 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint a Micromonospora rhodorangea (NRRL 5326) törzs a gentamicin-típusú G—418 jelzésű antibiotikumot, a Micromonospora grisea (NRRL 3800) törzs pedig a G—418 antibiotikum mellett gentamicin-A-t, sziszomicint és verdamicin-L antibiotikumot (a sziszomicin metil-származéka) termel. Ezzel az eljárással is — a 2 130113 sz. német szövetségi köztársaságbeli nyilvánosságrahozatali iratban ismertetett módszerrel megegyezően — igen alacsony hatásfokkal lehet a termékeket elkülöníteni. A fenti antibiotikumok közül a gentamicin-C, a sziszomicin és a verdamicin-I kiemelkedő hatást mutatnak a Pseudomonas törzsek ellen, míg a gentamicin-A, -B, -Bt és -X, valamint a G-418 antibiotikum a baktériumellenes hatáson túl jelentős protozoa- és féregellenes hatással is rendelkeznek a toxicitás és egyéb mellékhatások jelentős csökkenése mellett. Vizsgálataink során találtunk egy olyan, valamennyi eddig ismert gentamicin-típusú antibiotikumot termelő törzstől eltérő Micromonospora törzset (jelzése X—148), amely egyidejűleg képes a fenti antibiotikumok közül a gentamicin-Cj, -C la> -C2 , -A, -B, -B] és -X antibiotikumok, valamint sziszomicin termelésére. E törzs antibiotikum-termelő képességét különféle ismert módszerekkel (kémiai, mutagen és sugár-kezelés) jelentős mértékben sikerült fokozni. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott X—148 jelzésű új mikroorganizmus törzs leírását Waksman rendszere alapján Waskman „The Actinomytales" 2. kötet, Williams, Wilkins, Baltimore, USA (1961) az alábbiakban adjuk meg, összehasonlítva a gentamicin-típusú antibiotikumok termelésére képes hasonló törzsek leírásával : 5 Morfológia: Igen lassú növekedésű. A telepek baktériumtelepekre emlékeztetnek, kissé száraz felszínűek, épszélűek, általában a tápagarból enyhén kiemelkedőek, de egyben ab-10 ba besüllyedőek. Nem diffundáló pigmenttől feketés mélybordó színűek. Légmicélium nem képződik. Mikroszkóposán a fonalak hosszúak, sűrűn elágazók, 0,6—0,7 \L átmérőjűek. Konidiumok (spórák) igen ritkán láthatók a fonalakon; gömbalakúak, simafalúak, 15 1,00—1,30 (Ji átmérőjűek, spóratartók nincsenek. Biokémiai és fiziológiai tulajdonságok: Tápagar: nem nő. Glukóz-aszparagin agar: a telepek igen lassan növekednek, száraz felszínűek, kissé kiemelkedőek, táptalajba kapaszkodnak, épszélűek, feketésbíbor színűek. Tirozin-agar: 26 C°-on nem nő, 37 C°-on igen lassú növekedés, a telepek világos bíbor színűek, kevés cser színű pigment diffundál az agárba. 20 25 Kukoricaliszt agar: a telepek lassú növekedésűek, 30 a glukóz-aszparagin agáron észlelthez hasonlók. Véres agar: a telepek színe szürkés rózsaszín, hemolízis nincs. 35 Löffler-féle savótáptalaj: a telepek hús színűek; erős proteolízis észlelhető. 40 45 Cellulóz: gyengén nő. NaCl—tűrés: 3,5% (glukóz-élesztőkivonat agáron). Zselatin: folyósít. Szénforrás asszimiláció (alaptáptalaj: Czapek agartáptalaj) D-GIukóz: + Raffinóz: -D-Galaktóz: — Szorbóz: — Melecitóz: [(+)] Szacharóz: + Cellobióz + Glicerin: — Maltóz: + Trehalóz: [(+)] Szorbit: -50 Laktóz: — Melibióz: — Oldható keményítő: + L-Arabinóz: + L-Ramnóz: + D-Xilóz: + Galaktit: + D-Mannit: — Inozit: — Szalicin: — a-metil-D-55 -glukozid: — Jelmagyarázat: + =jó növekedés, ill. értékesítés [(+)] = gyenge növekedés, ill. értékesítés — = növekedés, ill. értékesítés nincs. 60 Az X—148 jelű törzs összehasonlítását a Micromonospora purpurea (NRRL—1953) és a Micromonospora purpurea var. violacea 55—5829 törzsekkel (deponálási szám: Coll. Microb. Bul., DKILS, 55/3. III. 1971.) 65 az alábbi táblázat mutatja:
