168735. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gamma-glutamil-p-nitroanilid-szárm előállítására és gamma-glutamiltranszpeptidaz aktivitásának meghatározására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. XII. 4. Német szövetségi köztársaságbeli elsőbbségei: 1972. XII. 5. (P 22 59 512.6) és 1973. VII. 3. (P 23 33 798.6). Megjelent: 1977. X. 31. 168735 Nemzetközi osztályozás: C 07 C 103/50 C 07 C 143/58 G 01 N 31/14 Feltalálók: BERNT Erich gyógyszerész, MÜNCHEN, Dr. GRUBER Wolfgang vegyész, GARATSHAUSEN, HAID Erich vegyésztechnikus, TUTZING/OBB., Dr. STÄHLER Fritz orvos, TUTZING/OBB., Dr. WAHLEFELD August Wilhelm vegyész, WEILHEIM/OBB., Dr. WEIMANN Günter vegyész, TUTZING/OBB , NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH, MANNHEIM-WALDHOF, NÉMET SZÖVETSÉGI KÖZTÁRSASÁG Eljárás Y-glutamil-p-mtroanilid-származékok előállítására és Y-glutamiltranszpeptidáz aktivitásának meghatározására i A találmány tárgya eljárás y-glutamil-4-nitroaniIidszármazékok előállítására és eljárás a y-glutamiltranszpeptidáz aktivitásának meghatározására. A glutamiltranszpeptidázt (y-GT-t) növekvő mértékben vizsgálják a klinikai kémiai laboratóriumokban, a májbetegségek diagnosztikájával kapcsolatban. A meghatározást ismert eljárás szerint a következő reakcióegyenlet alapján végzik: y-glutamil-p-nitroanilid + glicilglicin (y-G T) p-nitroanilin + glutamilglicilglicin. A sárga színű p-nitroanilin képződési sebessége optikai úton követhető, és ez a jelenlevő y-GT aktivitásának mértéke. Ezen eljárás rutinszerű alkalmazásának komoly hátránya a y-glutamil-p-nitroanilid szubsztrát instabilitása és rossz oldékonysága. A vegyület csak nehezen oldható és oldatban csak rövid ideig (kb. 2 óra hosszat) tartható el. Emellett mindig csak viszonylag kevés, rövid idő alatt elvégezhető meghatározások számára állíthattak elő oldatokat. A reagensoldatok nem voltak tárolhatók. További hátrányt jelentett, hogy az anyagot 50 és 60 C° közötti hőmérsékleten kellett oldatba vinni, ezen hőmérséklet fölött azonban spontán hidrolizált. Az említett hidrolízis viszont nagymértékben befolyásolja az oldatok extinkcióját, ami a mérés szempontjából döntő. Ez különösen akkor nagy hátrány, ha a y-GT meghatározásokat automata elemző készülékekben végzik, amikor is a fentiek miatt képződött nagy abszorpciók következtében nagyobb aktivitások nem mérhetők elég pontosan. Ennek következtében eddig csak az optimálisnál alacsonyabb, 3 és 4 millimól közötti szubsztrátkoncentrációknál végezték a méréseket, ellentétben a körülbelül 6 millimól optimális koncentrációval, (Clin. Chim. Acta 31 [1971], 175-179.). 5 A fenti hátrányokat részben sikerült kiküszöbölni a 2 042 829 sz. német szövetségi köztársaságbeli közzétételi iratban ismertetett reagens alkalmazásával, amelyet egy felületaktív anyag és polivinilpirrolidon jelenlétében alkalmaznak. Ezzel a reagenssel a y-glutamil-10 -p-nitroanilid oldékonysága jelentős mértékben megjavítható és az oldatok tárolhatósága is jelentősen nő. Azonban ebben az esetben is szükséges az 50 és 60 C° közötti hőmérsékletre történő melegítés, amely a spontán hidrolízis és ily módon a mérés pontatlanságának 15 veszélyével jár. így merült fel az igény olyan vegyületek előállítására, amelyeknek egyrészt sokkal jobbak az oldékonysági tulajdonságai mint a y-glutamil-p-nitroanilidé, másrészt pedig a y-GT enzim szempontjából legalább olyan 20 jó szubsztrátok, mint a y-glutamil-p-nitroanilid. A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű új vegyületek és ezek alkálifém-, alkáliföldfém-, ammónium- és aminsói előállítására, mely képletben R jelentése a (II) képletű y-glutamil-csoport és 25 X jelentése karboxil- vagy szulfoniloxicsoport. A találmány szerinti vegyületek a y-glutamil-p-nitroanilid fentemlített hátrányait kiküszöbölik, egyrészt kiváló oldékonysági tulajdonságokkal rendelkeznek és 30 ugyanakkor a y-GT enzimnek igen jó szubsztrátjai is. 168735 1
