168674. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-melanotropin, továbbá dibrómozott, illetve triciált származéka előállítására
168674 9 10 pon, ammóniumacetát pH és koncentrációgradienst használva frakcionáljuk. Az így kapott termék dibróm-oe-melanotropin-monoacetát-dihidrát. Termelés: 200 mg Rf=0,15 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 30: 20: 6: 11 arányú elegyében). Elemzés a Q9 H 115 N 21 0 23 Br 2 S (1919) képlet alapján: C H N O Br S számított: 49,4%, 6,0%, 15,3%, 19,2%, 8,3%, 1,7%; talált: 49,3%, 6,3%, 15,1%, 19,4%, 8,1%, 1,6%. 4. példa 5 és 11 helyen védett acetil-tridekapeptid-amid 12345 6789 10 11 (Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-GIu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-12 13 -Lys(BOC)-Pro-Val-NH2 ) előállítása. Az 1. példa szerint előállított 140 mg (0,2 millimól) Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-N2 H 3 képletű acetil-tetrapeptid-hidrazidot 0,4 ml dimetilformamidban szuszpendálunk, majd 0,2 ml vizet és 0,12 ml 6 n sósavat adva hozzá feloldjuk. A —20 C°-ra lehűtött oldathoz 15,2 mg nátriumnitritet adunk, 10 percig —5 C° és —10 C° közt tartva keverjük, majd 286 mg, a 2. példa szerint előállított, az 5 helyen levő glutamin-, sail helyen levő lizin-csoportján védett nonapeptid-acetátot, majd 0,054 ml trietilamint adunk hozzá 0,6 ml dimetilformamidban. Még egy órán át —5 C°-on keverjük, majd éjszakán át jégszekrényben állni hagyjuk. 6 ml etilacetát és 2 ml víz elegyével elkeverve a gelesen kiváló anyagot leszűrjük és NaOH felett megszárítjuk. Az így kapott termék az 5 és 11 helyen levő csoportján védett acetil-tridekapeptid-amid. Termelés: 275 mg (79%) Rf = 0,6 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 60: 20: 6: 11 arányú elegyében). 5. példa 123456789 a-Melanotropin(Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-10 11 12 13 -Arg-Trp-GIy-Lys-Pro-Val-NHj) előállítása. 38 mg 4. példa szerint előállított acetil-tridekapeptid-amidot 1 ml dimetilformamid és 1 ml víz elegyében oldunk, s 25 mg 10% palládiumot tartalmazó csontszénkatalizátor és 25 mg CaCOa (vagy ezek helyett 25 mg Pd/CaCOj katalizátor) jelenlétében 1 órán át hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk, és a maradékot karboximetil-cellulózt tartalmazó ioncserélő oszlopon kromatografálva tisztítjuk és liofilizáljuk. Az így kapott 12 mg termék a-melanotropin-monoacetát-dihidrát, liofilezett színtelen por. Rf = 0,10 (etilacetát: piridin: jégecet: víz 30: 20: 6:11 arányú elegyében). In vitro biológiai aktivitás: 1—2X 10 10 E/g [módszer: Endocrinology 54 553 (1965)]. Elemzés a C79 H 117 N 21 0 23 S (1761) képlet alapján: C H N O S számított: 53,9%, 6,6%, 16,7%, 20,9%, 1,8%; talált: 53,6%, 6,8%, 16,5%, 21,2%, 1,8%. 6. példa 1 2 3 4 5 Triciált a-melanotropin (Ac-Ser-[3,5-H3 -Tyr]-Ser-5 6 7 8 9 10 11 12 13 -Met-GIu-His-Phe-Arg-Trp: Gly-Lys-Pro-Val-NH 2 ) előállítása. A 4. példa szerint előállított 38 mg acetil-tridekapeptid-amidot az 5. példában ismertetett módon redukál-10 juk, tiszta hidrogéngáz helyett azonban tríciumot vagy különböző arányú hidrogén-trícium keveréket alkalmazva. A kapott termék triciált a-melanotropin, feldolgozása és tisztítása, valamint biológiai aktivitása az 5. példában leírtakkal megegyező. 15 Termelés: 11 mg színtelen liofilizátum. Rf =0,10 (etilacetát : piridin : jégecet : víz 30: 20: 6: 11 arányú elegyében). Fajlagos radioaktivitás: 2,62 Curie/millimól. Elemzés a C79 H U7 N 21 023S (1761) képlet alapján: 20 C H N O S számított: 53,9%, 6,6%, 16,7%, 20,9%, 1,8%; talált: 53,5%, 6,9%, 16,3%, 21,3%, 1,8%. Szabadalmi igénypont Eljárás az 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 30 Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys--Pro-Val-NH2 képletű — a képletben Ac acetilgyököt jelent, az 1—13 helyen alkalmazott szimbólumok pedig a peptidkémiában szokásos konvencionális rövidíté-35 sek, s az egyes L-konfigurációjú aminosav-csoportokat jelölik — a-melanotropin, továbbá a 2 helyen levő tirozin-csoporton 3,5-dibrómozott, illetve triciált származéka előállítására, azzal jellemezve, hogy 40 12 3 4 egy Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-N2 H 3 képletű — a képletben Ac és az 1, 3, 4 helyen levő szimbólumok jelentése a fent megadott, Dbt pedig 3,5-dibrómtirozin-csoportot jelent — tetrapeptidhidrazidból készített azidot 45 5 6 7 8 9 10 a) egy H-GluQqHíis-Phe-Arg-Trp-Gly-OH képletű hexapeptiddel — a képletben az 5—10 helyen levő szimbólumok jelentése változatlanul a fenti és Xx a peptidkémiában ismert és szokásos védőcsoportot, 50 célszerűen észter-csoportot jelent — kondenzáljuk, majd a kapott dekapeptidet egy H-Lys(X2 )-Pro-Val-11 12 13 -NH2 képletű — e képletben a 11—13 helyen levő szimbólumok jelentése a fent megadott és X2 a pep-55 tidkémiában ismert és szokásos védőcsoportot jelent — képletű tripeptid-amiddal kondenzáljuk, vagy 5 6 7 8 9 10 b) egy Z-GluíX^-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH képletű, az 5 helyen levő glutamin-csoporton védett hexapeptid 60 11 12 13 és egy Lys(X2 )-Pro-Val-NH 2 képletű, a 11 helyen levő lizincsoportján védett tripeptid-amid kondenzálásával kapott termék hidrolízise során keletkező 5 6 7 8 9 10 11 12 13 65 H-GluíX^-His-Phe-Arg-Trp-Gly-LysíX^-Pro-Val-5
