168673. lajstromszámú szabadalom • Eljárás réz-hiányállapot megszüntetésére alkalmas, parenterálisan adagolható rézlicinát-oldat előállítására

3 168673 4 réztartalma külső bevitel hatására gyorsan és jelentősen emelkedik, addig a szarvasmarha és a juh esetén a kötési sebesség és kapacitás olyan nagy, hogy a vérszint emelkedés csak kisebb mértékben, másodlagosan jön létre, a májból történő rézfelszabadítás eredményeként. A rézkiegészítésnek két alapvető módja ismeretes: szájon át történő és az injekciós, parenterális rézbevitel. Az első módszer lényege az, hogy a táplálékot vagy a takarmányt a vizsgált faj igényeinek megfelelően jól felszívódó rézvegyülettel egészítik ki. Ezzel az eljárással természetesen csak a primer rézhiányt lehet kiküszöbölni, a szekunder rézhiányt azonban még az előírt mennyiség többszörösének szájon történő bevitele sem szünteti meg. A prompt rézfeltöltés biztosítására, valamint a kondicionált hypocuprosis megszüntetésére világszerte többféle injekciós rézkiegészítő eljárást dolgoztak ki. Ezek két vegyület köré csoportosulnak. Az egyik a Cu-Ca-EDTA (etiléndiamin-tetraacetát), amely oldatba vihető, így könnyen, pontosan adagolható. Súlyos hibája az, hogy alacsony pH-ja miatt a beadás helyén a szöveteket súlyosan károsítja, izomelfajulást eredményez, ami az állat későbbi vágóértékét csökkenti. Ezenkívül a réz mellett egyéb iont is tartalmaz, amely viszont nem mindig kívánatos. E vegyület réztartalmát nem adja le teljesen, részben változatlan formában kiürül, és egyéb fontos ionokat is eltávolít a szervezetből. A másik hatóanyag a réz-glicinát, amely oldat formájában könnyen és gyorsan alkalmazható lenne. Az eddig ismert módszerekkel azonban csak igen savanyú kémhatáson (pH 3,0 alatt) vihető oldatba, ami a beadás helyén súlyos gyulladásos reakciót, izomelfajulást és fájdalmat okoz, ezért gyakorlatilag nem alkalmazható. A jelenleg forgalomban levő készítményeket ezért olajos (Dicuprene, Glaxo Co) vagy habzó szuszpenzió (Copavet, Crookes Ltd., Anglia) formájában hozzák forgalomba. Ezeknek a készítményeknek előnytelen tulajdonsága az, hogy állandóan rázni kell őket, ennek ellenére a szuszpenzió viszonylag gyorsan ülepedik, így a pontos, egyenletes adagolás nem valósítható meg. A gyors ülepedés következtében a hatóanyag eloszlása inhomogén, jelentős része az üvegből ki sem nyerhető. Így a deklarált hatóanyagot sem pontosan, sem maradéktalanul nem lehet felhasználni. Laboratóriumi fehérpatkányokban e készítmények izomba történt fecskendezése helyén súlyos tályog alakult ki. Szarvasmarhában pedig 72 órán túl csökkenő gyulladásos duzzanat jön létre, amelynek a helyén még hetek múlva is tömött, fájdalmas góc tapintható. Találmányunk alapja az a felismerés, hogy a rézglicinát citromsavval és Na-citráttal kiegészítve valódi oldatot képez úgy, hogy az oldat pH-ja (6,0 ±0,2) megfelel az élettani, gyógyszertani követelményeknek, ezenkívül a kapott oldattal kérődzőknél a befecskendezett réznek a hepatocupreinbe történő beépítésével élettani szabályozáson alapuló retard-hatást érhetünk el. Ez azt jelenti, hogy a máj feltöltött rézraktára legalább két hónapig folyamatosan biztosítja a szervezet rézellátását. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy az oldatba vitt rézglicinát maradéktalanul és pontosan adagolható és az előírt dózisban alkalmazva fiatal és felnőtt állatokba egyaránt minden káros következmény nélkül befecs-5 kendezhető. A találmány értelmében úgy állítunk elő rézhiányállapot megszüntetésére alkalmas, parenterálisan adagolható rézglicinát-oldatot, hogy az oldat összsúlyára vonatkoztatva 3,0-3,5% rézglicinátot, 10 1,0-1,5% citromsavat és 5,0-7,0% nátriumcitrátot pirogén-mentes desztillált vízben oldunk és adott esetben valamely helyi érzéstelenítőt, előnyösen prokain-hidrokloridot adunk hozzá, majd az oldatot legalább 10 órán át állni hagyjuk. A kapott oldatot 15 ampullázás előtt a szokásos módon sterilizáljuk. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi példát adjuk meg. 20 Példa 3,5 g rézglicinát-monohidrátot (réztartalom 30,0%), 1,0 g citromsav-monohidrátot, 6,0 g nátriumcitrátdihidrátot és 1,0 g prokain-hidrokloridot összemé-25 rünk, és desztillált vízzel 100 ml-re feltöltjük, majd alaposan összerázzuk. Enyhén zavaros, kékszínű oldatot kapunk, amely 12 órás állás után kristálytisztává válik, pH-ja 6,0. Az oldat réztartalma: 10 mg Cu/ml. 30 A kapott oldatot sterilizálás céljából 20 percen át 100 °C-on és 1,2 at nyomáson autoklávban melegítjük vagy membrán szűrőn szűrjük. A kapott oldat réz-hiányállapot megszüntetésére alkalmas, különösen szarvasmarhák esetén. 35 A réz-hiányállapot a hiánytünetek alapján feltételezhető, de csak a vérszérum teljes réztartalmának kémiai meghatározásával diagnosztizálható. Hiányállapotról akkor beszélünk, ha a szérum teljes réztartalma kisebb, mint 0,5-0,6 ppiii (ug/g), il-40 letve, ha a máj réztartalma a fajra jellemző érték egytizedére csökken. Szarvasmarháknál, amelyekben a hypocuprosis a leggyakoribb, a hiányállapot súlyossága alapján az injekciós készítményből 10-15 ml-t kell mélyen izomba fecskendezni. Ennek ered-45 menyeként a máj elraktározza a beadott rézmennyiséget és ezzel egyúttal a szérum réztartalmát is emeli. Szarvasmarháknál 80-100%-os, egyéb állatfajokban még nagyobb vérszérum, vizelet, tej réztartalom emelkedéssel számolhatunk, amely a Student-50 féle „t"-próba szerint szignifikáns különbséget jelent (p ^ 0,05 szinten). Szarvasmarhánál az előzőekben ismertetett szabályozó mechanizmus következtében 100-150 mg Cudózis hatására a vér teljes Cu-tartalma 2 hónapi idő-55 tartamig 0,5-0,6 ppm között állandósul. Ez ebben az időszakban kielégítő rézellátottságot jelent. Vizsgálatainkat részben laboratóriumi fehérpatkányokon, részben két jelentős rézhiányos terület szarvasmarhaállományán végeztük. A kapott ered-60 menyeket a mellékelt ábrákon szemléltetjük. Az 1. ábra a példában szereplő készítménynek (jelzése R) és az ismert habzó szuszpenzió készítménynek (Copavet, jelzése C) a vérszérum teljes réztartalmára gyakorolt hatását ábrázolja patká-65 nyon. A kezeletlen kontroll állatok vérszérumának 2