168378. lajstromszámú szabadalom • Eljárás orgotein kromotográfiás elkülönítésére egy lépésben

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. XII. 7. (DA-303) Amerikai egyesült államokbeli elsőbbsége: 1971. XII. 7. (205 609; 205 610) Közzététel napja: 1975. X. 28. Megjelent: 1977. III. 31. 168378 Nemzetközi osztályozás: C 07 G 7/04 Feltalálók: HUBER Wolfgang vegyész, San Francisco, Kalifornia SAIFER Mark Gary, vegyész, Berkeley, Kalifornia CHOW Silver Hcung vegyész, Sunnyvale, Kalifornia HUEBNER Angelika Hedwig vegyésztechnikus, New York Amerikai Egyesült Államok Tulajdonos: Diagnostic Data, Inc., Mountain View, Kalifornia, Amerikai Egyesült Államok Eljárás orgotein kromatográfiás elkülönítésére egy lépésben 1 A találmány tárgya új eljárás orgotein kromatográfiás elkülönítésére egy lépésben. Ismeretes, hogy az orgotein fizikai, kémiai és farmakológiai tulajdonságok jellegzetes kombinációjával rendelkező, azonos típusú fehérjék családja. 5 Ezek az azonos típusú fehérjék fizikailag úgy jellemezhetők, hogy valamennyi természetes állapotban tömör szerkezetű, gömb alakú, valamint pufferoldatokban és vízben oldható fehérjéből elkülönített, lényegében tiszta izolátum, amely hő hatására labilis 10 szerkezetű ugyan, de 0,60-1,00 Á ionsugarú kétvegyértékű fém sóját tartalmazó vízben vagy pufferoldatban 65 C°-on néhány percen át stabil, és 0,01 mólos trisz-glicin-pufferben pH 8,45-on végzett gél-elektroforézis során jellemző több sávos mintát ad. Az 15 említett azonos típusú fehérjék kémiailag úgy jellemezhetők, hogy az összes vagy majdnem az összes alapvető aminosavat, továbbá kis százalékban szénhidrátot tartalmaznak, nem tartalmaznak viszont lipoidokat. Tartalmaznak továbbá mólonként 3—5 gramm 20 0,60—1,00 Ä ionrádiuszú egy vagy több kétvegyértékű fémkelátot, így fémtartalmuk 0,1«-1,0%, valamint molekulájukban lényegében nincs egyvegyértékű kelátkötésben levő fém vagy sejtméreg. Az azonos típusú fehérjék farmakológiai hatása úgy jellemez- 25 hető, hogy nem mérgezők, immunológiailag jól elfogadhatók és injektálhatok, aktivitásuk elsősorban gyulladásgátló hatásban jelentkezik, mely hatásuk, miként tömör szerkezetük is, összefügg kétvegyértékű fémkelát tartalmukkal. Az orgoteint alkotó nyers 30 fehérjekomponensek immunológiai rokonsága alapján nyúlban vagy más alkalmas állatban előállított ellenanyagaik felismerhetők, továbbá egy vagy több más orgotein fehérjekomponens és/vagy más orgotein fehérjekomponenshez tartozó ellenanyagok antigénként való felismerése lehetővé válik, miként ezt a gél-immunelektroforézis és/vagy a gél-immundiffúzió bizonyítják. Bár az orgotein egyes fehérjekomponenseinek bizonyos fizikai és kémiai tulajdonságai, valamint farmakológiai hatásuk típusa és hatékonyságuk komponensről komponensre változik, mégis az orgotein komponensei együtt a tulajdonságok fent említett kombinációjával rendelkeznek. Az ismert irodalmi közleményekből megállapítható, hogy a fémet tartalmazó fehérjék családjához tartozó orgoteinek magukba foglalják a korábban különböző tisztasági fokban elkülönített és különböző nevekkel ellátott fehérjéket, így a hepatokupreint [Mann és Keilin: Proc. Royal. Soc. for Biol. Sei., 126, 303 ((1939)]; a cerebrokupreint [Porter és Ainsworth: J. Neurochem., 1, 260 (1957)]; az eritrokupreint [Markowitz és társai: J: Biol. Chem., 223, 40 (1959)]; és a citokupreint [Carrico és Deutsch: J. Biol. Chem. 224, 6087 (1969)]. Más irodalmi közlemények közül lásd Mohamed és Greenberg: J. Gen. Physiol., 37, 433 (1954); Porter és Folch: Arch. Neurol. Psychiat, 77, 8 (1957); Porter és Ainsworth: J. Neurochem., 5, 91 (1959); Krímmel és társai: J. Biol. Chem., 234, 46 (1959); Wyman: Biochem. Biophys. Acta, 45; 387 (1960); Shieds és társai: J. 168378 1