168325. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino- 3-metil-cef-3-ém-4- karbonsav enzimes előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL ' SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. VI. 18. (TO-913) Közzététel napja: 1975. X. 28. Megjelent: 1977. III. 31. 168325 Nemeztközi osztályozás: C 07 b 29/02 C 12 d 13/10 Feltalálók: YAMAGUCHI Tsutomu vegyész, Ohito ISHI1 Hiioshi vegyész, Nirayama Shizuoka-ken, Tulajdonos: Toyo Jozo Kabushiki Kaisha, Ohito Shizuoka-ken, án Eljárás 7-amino-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsav enzimes előállítására 1 A találmány tárgya eljárás 7-amino-3-metil-cef-3-ém-4-karbonsav (a továbbiakban 7-ADCA) előállítására 7-acüamino-3-metil-cef-3-fém-4-karbonsav enzimes dezacilezésével az Arthrobacter simplex ATCC 15799, Kluyvera citrophila ATCC 21285, Proteus 5 rettgeri ATCC 9250 vagy Micrococcus sp. NRRL B-2753 baktériumtörzsek egyike által termelt enzim alkalmazásával. Ez ideig a 7-ADCA-t különféle vegyi elbontásos és enzimes hasításos eljárással állítottuk elő. Nem volt 10 ismeretes olyan eljárás a 7-ADCA előállítására, amely az Arthrobacter, Kluyvera, Proteus vagy Micrococcus nemekhez tartozó mikroorganizmusokat alkalmazta volna. A 475 284 számú svájci szabadalmi leírás ismerteti 15 a 7-aminodezacetilcefalOsporánsavnak, tehát 7-amino-3-hidroximetil-cef-3-ém4-karbonsavnak a 7-aminocefalosporánsav mikrobiológiai dezacilezésével való előállítását. Az 507 983 számú svájci szabadalmi leírás szerint 7-acilamino-3-aciloximetil-cef-3-ém-4-karbon- 20 savszármazékokat állítanak elő olyan módon, hogy O-dezacetil-cefalosporin-C-dibenzhidrilésztert a cefámgyűrű 3-helyzetében észteresítenek, és a 7 oldalláncot iminohalogemd-iminoéter-hasítással eltávolítják, majd -a 7-aminocsoportot acilezik. 25 Az 1 193 302 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás a 7-helyzetben R-CH-CO-NH-csoporttal COOH szubsztituált cefalosporánsav-származékokat közöL A 30 159 043 számú magyar szabadalmi leírás a 475 284 számú svájci szabadalmi leírás szerinti eljárás termékének, a 3-bidroximetil-csoportot tartalmazó vegyületnek a származékait írja le. A 161 043 számú magyar szabadalmi leírás 7-acilamino-3- dezacetoximetil-3-formil-izocefalosporánsav-származékok i előállítását ismerteti. A találmány szerinti eljárásban a 7-acilamino-3-metil-cef-ém-4-karbonsavak 7-ADCA-vá való átalakítását egyetlen lépésben végezzük, míg a korábbi kémiai eljárásokban szerves oldószerekre és reagensekre van szükség, és a többlépéses művelet során védeni kell a 4-karboxilcsoportot. Az eddig e célra nem alkalmazott mikroorganizmusokkal végíehajtott eljárás folytonos üzemű lehet, és a hozama kitűnő, például a 4. példában Proteus rettgeri ATCC 9250 mikroorganizmussal 90%. Azt találtuk, hogy a Bacillus megaterium egyik törzse olyan enzimet termel, amely a 7-acilamino 3-metil-cef-3-ém-4-karbonsavat 7-ADCA-vá hasítja. Azonban az ezt a törzset felhasználó enzimes eljárás az alkalmazott körülményektől függően hajlamos az acilezési reakcióval ellentétesen lejátszódni. Ezért mérlegeltük a 7-ADCA enzimes előállításának lehetőségeit, és számos mikroorganizmust tanulmányoztunk, amelyek a '7-acilamino-3-metil-cef-ém-4-karbonsavat ellentétes irányú reakció nélkül képesek dezacilezni. Azt találtuk, hogy az amerikai egyesült államokbeli ATCC és NRRL tartósított gyűjteményből származó Arthrobacter simplex ATCC 15 799, 168325 1