168313. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biotin mikrobiológiai úton történő előállítására

9 168313 10 B-321 Cukor bontása folyékony kultúrában inozit glicerin keményítő se sav, se se sav, se se sav, se ramnóz se sav, se inulin se sav, se glikogén se sav, se dextrin se sav, se cukor nélkül se sav, se A találmány szerinti eljárást az alábbi nem korlátozó példákkal szemléltetjük: 1. példa 2% n-paraffint, 0,35% nátrium-hidrogén-foszfátot, 0,25% kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,1% magnéziumszulfátot, 0,01% nátrium-kloridot, 0,01% kukoricalekvárt és 0,2% karbamidot tartalmazó 100-100 ml folyékony tápközeget (pH 6,0) öntünk 10 db 500 ml térfogatú Sakaguchi lombikba. Sterilezés után a 2% előzetesen azonos összetételű tápközegben tenyésztett Corynebacterium primorioxydans-szal (B—321 FERM-P 1427) oltjuk be, majd 30 °C hőmérsékleten rázógépen 24 óra hosszat tenyésztjük. Ezután a (II) képletű vegyület 50 mg/ml koncentrációjú etanolos oldatának 2 ml-ét adjuk mindegyik lombikhoz, és a tenyésztést 30 °C hőmérsékleten további 5 napig folytatjuk. A tenyésztés befejezése után a tápoldatot centrifugával sejtekre és szurletre választjuk szét. A sejteket desztillált vízzel mossuk, a szűrletet és a mosófolyadékot egyesítjük, és a pH-t 3,0-ra állítjuk. Ezután a termelt biotin adszorbeálására 2% aktívszenet adunk hozzá, a folyadékot összekeverjük. Az aktívszenet szűréssel összegyűjtjük, majd 50—50% ammónia-etanol oldattal eluáljuk. Az oldószer ledesztülálása után 1,45 g maradékot kapunk. A maradékot gyengén lúgos vízben oldjuk, majd 3 X 150 cm méretű és Dowex 1 X 2 típusú (formiát alak) töltetű oszlopon adszorbeáltatjuk. Ezután az oszlopot vízzel mossuk, majd 0,01 mólos hangyasawal eluáljuk. A biotintartalmú frakciót csökkentett nyomáson töményítve 0,85 g nyers kristályt kapunk, amelyet vízből átkristályosítva 232 °C olvadáspontú 0,80 g biotint kapunk. A termék infravörös abszorpciós és NMR spektruma megegyezik a standard termék spektrumaival. 2. példa Az 1. példában leírt eljárással azonos módon Corynebacterium primorioxydans var. forte-t (B—323 FERM-P 1428) tenyésztve és a kapott fermentlét kezelve 0,85 g biotint kapunk. A termék infravörös abszorpciós és NMR spektruma megegyezik a standard termék spektrumával. B-323 B-3252 gáz se sav, se gáz se sav, se gáz gáz se sav, se gáz se sav, se gáz gáz se sav, se gáz se sav, se gáz gáz se sav, se gáz se sav, se gáz gáz se sav, se gáz se sav, se gáz gáz se sav, se gáz se sav, se gáz gáz se sav, se gáz se sav, se gáz gáz se sav, se gáz se sav, se gáz 3. példa Az 1. példában használt összetételű 100 ml tápközeget öntünk 500 ml térfogatú Sakaguchi lom-25 bikba. Sterilezés után előzőleg azonos összetételű tápközegben tenyésztett 2% Pseudomonas mutabilisszel (B-3252 FERM-P 1429) oltjuk be, és 25 °C hőmérsékleten rázógépen 24 óra hosszat tenyésztjük. Ezután a (II) képletű vegyület 50 mg/ml koncent-30 rációjú etanolos oldatának 2 ml-ét adjuk a tápközeghez, és a tenyésztést 25 °C hőmérsékleten további 5 napig folytatjuk. A tenyésztés befejezése után a fermentlét az 1. példában leírttal azonos módon kezelve 73 mg biotint kapunk. A termék infravörös 35 abszorpciós spektruma megegyezik a standard termék spektrumával. 4. példa Nocardia corallina-t (IFO 338) tenyésztve és a 40 kapott fermentlét az 1. példában leírttal azonos módon kezelve 232 °C olvadáspontú 0,56 g biotint kapunk. A termék infravörös abszorpciós spektruma megegyezik a standard termék spektrumával. 45 5. példa Mycobacterium smegmatis-t (IFO 3083) tenyésztve és a kapott fermentlét az 1. példában leírttal azonos módon kezelve 0,40 g biontint kapunk. A termék infravörös abszorpciós spektruma megegyezik 59 a standard termék spektrumával. 6. példa 2% paraffint, 0,35% nátrium^tidrogén-foszfátot, 0,25% kálium-dihidrogén-foszfátot, 0,10% magné-55 zium-szulfátot 0,01% nátrium-kloridot, 0,01% kalcium-kloridot, 8 mg/l cink-szulfátot, 8 mg/l mangánszulfátot, 10 mg/l vas-szulfátot, 40 mg/l réz-szulfátot, 0,01% kukoricalekvárt és 0,2% karbamidot tartalmazó 100-100 ml folyékony tápközeget (pH 7,0) 60 öntünk 10 db 500 ml térfogatú Sakaguchi lombikba, és azokat sterilizáljuk. Ezután előzetesen azonos összetételű tápközegben tenyésztett 2% Arthrobacter paraffineus-szal (ATCC 21003) oltjuk be, és a tenyésztést 30 °C hőmérsékleten rázógépen 2 napig 65 folytatjuk. Ezután a (II) képletű vegyület 50 mg/ml 5