168234. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 20béta-hidroxi-9- oxo-1,2,3,4,10,19-hexa-nor- 5,9-szekopregnán-5-karbonsav előállítására
5 168234 6 inkubáljuk. A kapott előtenyészettel kisfermentorban levő 8 liter fenti összetételű táptalajt beoltunk és 2 napon át 28 C°-on keverés és levegőztetés közben (640 fordulat/perc, 2 liter levegő/perc) inkubáljuk, miközben a pH-t 28%-os nátrium- 5 hidroxid-oldattal 7,0 értékre állítjuk be. A kisfermentor tartalmával 180 literes fermentorban levő, a fentivel azonos összetételű táptalajt oltunk be és 32C°-on keverés (1100 fordulat/perc) és levegőztetés (100-130 liter levegő/ perc) mellett 10 inkubáljuk. A táptalaj glükóz-tartalma 27 óra elteltével 0,2%-ra csökken. Ekkor 180 g 30,200-dihidroxi-pregn-5-én és 3600 ml dimetilszulfoxid oldatát adjuk hozzá. A szteroid átalakulását a minták vékonyrétegkromatográfiás meghatározásával kö- 15 vetjük. A pH-t nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával 6,5 és 7,0 között tartjuk. A kiindulási anyagként felhasznált szteroid 20 63 óra után teljesen átalakult. Ekkor a fermentléhez további 180 g 3(3,20j3-dihidroxi-pregn-5-én dimetilszulfoxidos oldatát adjuk. A szteroid teljes lebontása (90 óra) után újabb 180 g szteroidot adagolunk be. Ez. a szteroid mennyiség 155 óra 25 alatt alakul át. A fermentlevet centrifugáljuk, 20 liter vízzel utánöblítjük és a pH-t tömény sósavval 2,0 értékre állítjuk be. Az oldatot térfogatával azonos mennyi- 30 ségű metilénkloriddal kétszer és fele térfogatú metilénkloriddal egyszer extraháljuk. Az extraktokat forgóbepárlóban betöményítjük és ellenáramú extrakcióval feldolgozzuk. A 20/3-hidroxi-9-oxo-1,2,3,4,10-19-hexa-nor-5,9-szeko-pregnán-5-karbon- 35 sav kitermelése 82%, a célvegyület mellett 10% 9,20-dioxo-l ,2,3,4,10,19-hexa-nor-5-szeko-pregnán-5--karbonsavat izolálunk. 3. példa 0,2% NH4 N0 3 -t 0,1% KH2 P0 4 -t 0,2% K2 HP0 4 -t 0,1% Na2 HP0 4 • 7H 2 0-t 0,02% MgS04 • 7H 2 0-t 0,02% KCl-t 0,0001% FeS04 • 7H 2 0-t 1% szacharózt csapvízben tartalmazó 100 ml tápoldat (pH = 7,0 nátriumhidroxiddal beállítva) az 1. példa szerint előállított két ampulla tartalmával beoltunk. A tenyészetet 48 órán át 28 C°-on rázatás közben inkubáljuk. A kapott előtenyészettel kisfermentorban 8 liter táptalajt beoltunk és 28 C°-on keverés és levegőztetés közben inkubálunk. 28 óra múlva 8 g 2O0-hidroxi-pregn-4-én-3-on és 160 ml dimetilszulfoxid oldatát adjuk hozzá és addig inkubáljuk, míg vékonyrétegkromatográfiás meghatározás szerint kiindulási anyag már nincs jelen. A fermentlevet a 2. példa szerint dolgozzuk fel a 20j3-hidroxi-B-szekosavat 56%-os kitermeléssel kapjuk és mellette 6,7% 20-keto-B-szekosavat izolálunk. Szabadalmi igénypont: Eljárás az (I) képletű 2Q|3-hidroxi-9-oxo-1,2,3,-4,10,19-hexa-nor-5,9-szeko-pregnán-5-karbonsav előállítására, azzal jellemezve, hogy 30,20/3-dihidroxi-pregn-5-ént vagy 20|3-hidroxi-pregn-4-én-3-ont tartalmazó táptalajban alifás szénhidrogéneken történő tenyésztéssel azokhoz adaptált és szénforrásként 20/3-hidroxi-9-oxo-l,2,3,4,10,19-hexa-nor-5,9-szeko-pregnán-5-karbonsavat nem hasznosító Mycobacterium phlei ATCC 19249 törzset tenyésztjük. 1 lap rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 764163 - Zrínyi Nyomda 3
