168234. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 20béta-hidroxi-9- oxo-1,2,3,4,10,19-hexa-nor- 5,9-szekopregnán-5-karbonsav előállítására

MAGTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. VIII. 16. (HO-1605) Svájci elsőbbsége: 1972. VIII. 31. (12838/72) Közzététel napja: 1975. X. 28. Megjelent: 1977. II. 28. 168234 Nemzetközi osztályozás: C 07 c 61/38, 35/32 Feltalálók: Becher Elisabeth vegyész, Basel, Schocher Arno Johannes mikrobiológus, Benken, Widmer Erich vegyész, Ariesheim, Svájc Tulajdonos: F. Hoffmann-La Roche et Co. Aktiengesellschaft, Basel, Svájc Eljárás 20(3-hidroxi-9-oxo-l,2,3,4,10,19-hexa-nor-5,9-szeko-pregnán-5-karbonsav előállítására 1 A találmány tárgya eljárás az (I) képletü 2O0-hídroxi-9-oxo-l, 2,3,4,10,19-hexa-nor-5,9-szeko-pregnán-5-karbonsav előállítására. A találmány tárgyát képező eljárás szerint a fenti új vegyületet oly módon állítjuk elő, hogy 3|3,2O0-dihidroxi-pregn-5-ént vagy 20j3-hidroxi-pregn-4-én-3-ont alifás szénhidrogéneken történő tenyésztéssel azokhoz adaptált Mycobacterium phlei ATCC 19249-el fermentálunk. 10 Az M. phlei ATCC 19249 törzsnek a találmányunk szerinti eljáráshoz szükséges, alifás szénhidrogéneken történő adaptációját önmagában ismert módon úgy végezhetjük el, hogy a mikro- 15 organizmust glükózt tartalmazó tenyészet-szubsztrátumokból olyan szubsztrátumokra oltjuk át, melyekben a glükózt egyre nagyobb mennyiségű alifás szénhidrogénekkel, különösen 14-18 szénatomos alkánokkal helyettesítjük. 20 Az adaptáció előnyösen a következőképpen végezhető el: A 2. példa szerinti táptalajt 0,1% élesztőextrakttal és 1% n-alkánkeverékkel elegyítjük és 25 erősen beoltjuk, majd 30C°-on 250ford./perc sebességű rázatás mellett erős növekedés fellépéséig inkubáljuk. Ezzel a tenyészettel hasonló összetételű, azonban a glükóz- és élesztőextrakt-mennyiség csupán 75%-át tartalmazó táptalajt beoltunk és 30 a fentiekhez hasonló módon járunk el. A fenti módszerrel a glükóz- és élesztőextrakt-mennyiséget fokozatosan 50%-ra, 25%-ra, 10%-ra, majd 0%-ra csökkentjük és a 6. művelet után nyert tenyészet szénforrásként kizárólag n-alkánokat képes hasznosítani. Mutánsként spontán mutáció vagy fizikai vagy kémiai úton képezett mutánsokat alkalmazhatunk. A mutánsokat besugárzással (pl. ultraibolya fény vagy gamma-sugárzás hatására) vagy mutáló ágensekkel (pl. N-metil-nitrozo-guanidinnel vagy brómuracillal) készíthetjük. A találmány szerinti eljárásnál előnyösen alkalmazhatunk spontán mutánsokat. A mutánsok szelekcióját oly módon végezhetjük el, hogy az egyes telepeket szén-forrásként a lebontandó szteroidot tartalmazó agar-lemezekre visszük át. A fenti agar-szubsztrátumokból kapott egyes telepeket ezután olyan agar-lemezekre visszük át, melyek szén-forrásként a kívánt eljárás-terméket, azaz a fent említett szeko-savat tartalmazzák. A találmány szerinti eljáráshoz azokat a tenyészeteket alkalmazzuk, melyek ilyen táptalajokon nem mutatnak növekedést. A találmány szerinti eljárást a szteroidoknak mikroorganizmusokkal történő aerob fermentációs módszereivel analóg módon hajthatjuk végre. Tenyészet-szubsztrátumként elsősorban asszimilálható nitrogénforrást, asszimilálható szén-forrást és szervetlen sókat tartalmazó folyékony táptalajokat 168234