168223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás
7 168223 8 Irodalmi adatok szerint a szilimarin, illetve az egyes flavonoid komponensek keveréke (Legalon 1*) széleskörű állatkísérletekkel vizsgálva, — amit hazai adatok is igazolnak - nem toxikus akut és krónikus adagolásban sem. Májkárosodást kivédő 5 (antihepatotoxikus) hatását széntetrakloriddal létrehozott májártalmaknál vizsgálták, amit hexabarbiturátokkal objektívebbé tettek. Az a-amintin mérgezés is kivédhető alkalmazásukkal. Végeredményben a különböző patofiziológiás máj-model- 10 leken a flavonolignánok protektiv és kurativ hatását kétségen kívül bizonyították. Hatásmechanizmusuk újszerű. Az eddig közölt többszáz klinikai eset kapcsán hatásos volt emberen is krónikus hepatitisnél, májcirrózisnál, májelzsíroso- 15 dásnál, krónikus alkoholisták máj megnagyobbodásánál stb. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 20 1. példa 6 kg lisztfinomságúra őrölt S. eburneum termést (olaj: 26%, flavon: 3%) az Lábra szerinti úgynevezett szimultán extraktor A edényében 3x10 liter széntetrakloriddal feliszapolunk. Néhány perces ülepítés után az alsó, olajos-keményítős iszapfázist átengedjük a B desztilláló térbe. Az extraháló terel oldószerrel a túlfolyóig feltöltve a rozsdabarna színű maghéjfázis/oldószerzagy térfogataránya 1 : 3 lesz. Az A edény felső egyharmadába épített fűtőcsőkígyóval az oldószert enyhe forrásban tartva (77 C°) biztosítjuk a maghéjfázis konvektív keveredését. Ugyanakkor a B desztilláló üst beindított fűtésével a cirkulációs rendszer sebességét 1 kg magra 7 kg széntetraklorid/óra-ra állítjuk be. 5 órán át tartó extrakció után, amikor a maghéj alatti oldószer fázis kitisztul, a műveletet befejezettnek tekintjük. A szilárd fázisokat szűrjük, szárítjuk, a zsírosolajról a széntetraklorid-ot lepárolva regeneráljuk és így a következő termékekhez jutunk: dúsított maghéj keményítő zsírosolaj flavon értéktelen flavon 3,5 kg (58,5%), 0,94 kg (15,8%), 1,54 kg (25,7%), 5,5%, 0,7%. 3,5 kg szárított maghéjat formamiddal 1 : 1 g/v arányban 15 percen át homogenizálunk és éjszakán (15 órán) át állni hagyjuk. A barnult és duzzadt tömeget perkolálóban 24 liter etilacetáttal felöntjük, gyorsan leeresztjük és a sötétvörös előextraktumot homogenizálásra visszaöntjük. Ezt követően 2 liter/óra sebességgel 14 liter első perkolátumot szedünk továbbfeldolgozás céljára. A műveletet folytatva a második 14 liter perkolátummal már a következő drog sarzs extrahálását kezdjük meg (2. sarzs „első perkolátum")- A droghoz kötött etilacetátot vízgőzzel regeneráljuk. A 2. ábrán szemléltetett, négylépcsős-egységből álló, úgynevezett kvázifolyamatos ellenáramú, 280 ml keverő- és 280 ml ülepítő-térfogatú folyadék/folyadék extraktorba (mixer-settler) visszük be az első perkolátumot, és 3%-os vizes nátriumklorid-oldattal megosztjuk. Ezt követően a sós extraktlé hasznos flavon tartalmát további két lépcsőben tiszta etilacetáttal utóextraháljuk. A folyamatos műveletnél a sóléadagolás 0,6 liter/liter, az utóextrakció 0,4 liter etilacetát/liter perkolátum, a tartózkodási idő 3,5 perc. A vörösbarna sós raffinátumot elöntjük. A világossárga színű formamid- és poláris oldható flavon-mentes etilacetát-oldatot vákuumban bepároljuk. A 250 g sárgás-barna, amorf fenékterméket 1 liter 10%-os kalcium-klorid-os metanolban felvesszük, 3x100 ml petroléterrel (fp.: 30-40 C°) zsírmentesre kirázzuk. Végül a kalcium-klorid-os alsó fázist állandó keverés közben vízbe csepegtetjük (1 óra), ekkor a flavonoid keverék sárga csapadék alakjában válik le. A felettes folyadék átlátszó és tiszta. Vákuumban szűrjük, vízzel szuszpendálva mossuk és feldolgozzuk. Ily módon 130 g (2,2%g/mag%) világossárga színű nyersterméket kapunk, op.: 155-160 C°. 130 g szilidianinos (60%) nyersterméket 384 ml 25 metanolban oldva, a vörösbarna oldatot 16 ml vízzel cseppenként telítjük. Beoltva 2—3 napig jégszekrényben tartva kristályosítjuk. A leszűrt terméket kevés metanollal mossuk, szárítjuk. Hozam: 39,2 g (0,65% g/mag%) alig színezett ter-30 mék, op.: 165—171 C°. Ezt 196 ml forró acetonban oldva, szűrjük és 98 ml metanollal telítjük, így a kristály metanolátot (op.: 172-176 C°) kapjuk. Ezután 34 g fehér termékből 340 ml 10%-os kalcium-klorid-os metanolban és 240 ml 35 desztillált formamidban melegen (50 C°) oldva, szűrve, keverés közben 6000 ml desztillált vízbe csepegtetve, 15 órai (+4 C°) állás után pelyhes tűk alakjában leváló szilidianin-hidrátot kapunk, hozam: 31,6g, op.: 189-191 C°, [aß0 =+214° (c = 0,25, 40 95%-os EtOH), amely autentikus mintával olvadáspont csökkenést nem adott. 2. példa 45 3 kg finomra őrölt S. marinaum termést (olaj: 10,6%, flavon: 2,3%) 300 ml dimetilformamiddal percen át homogenizálunk, majd 15 órán keresztül állni hagyjuk. Hűtőn keresztül feltöltve 3 liter acetonnal a feltárt drogot lenvászon zsákban, 50 gőztérben 4 órán át forraljuk visszafolyató hűtő alkalmazásával. A zöldessárga színű kétfázisú extraktumot vízfürdőn (50 C°), vákuumban (60 torr) oldószermentesre pároljuk. A kapott két-fázisú emulziót elválasztva, (felső fázis 302 g olaj) az alsó 55 330 ml dimetilformamidos flavon-oldatot 400 ml etilacetáttal és 330 ml 2%,-os vizes NaCl-oldattal kikeverjük. Az alsó, vörösszínű nátriumkloridos vizes fázist még 2 x 200 ml etilacetáttal, majd az egyesített 900 ml térfogatú etilacetátos fázisokat 60 pedig 3 x 150 ml 2%-os vizes nátriumklorid-oldattal hasonlóképpen kirázzuk, illetve a flavonoidokat megosztjuk. A világossárga színű 900 ml térfogatú etilacetátos extraktumot vákuumban 1/3 térfogatra bepároljuk (50 C°). A sűrítményt 75 ml 5% 65 kalcium-klorid-tartalmú etilénglikollal erős mecha-4
