168222. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 17a-oxa-D-homo-androszta- 1,4,6-trién-3,17-dion előállítására
5 168222 6 extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A kapott nyers terméket preparatív vékonyrétegkromatográfiás módszerrel tisztítjuk. A preparatív vékonyrétegkromatográfiás tisztításnál Kieselgel-G (Reanal, Budapest) és Kieselgel HF25 4+366 (Merck, Darmstadt) adszorbensek 2 :1 arányú keverékéből készített 1 mm vastagságú réteget és 80% etil-acetát: 20% heptán összetételű futtató-elegyet használunk. A kromatográfiásan tiszta terméket aceton-éter elegyből kristályosítva 1,8 g 17a-oxa-D-homo-androszta-4,6-dién-3,17-diont kapunk. Op.: 196-198 C°, [a]D=-39° (c=l, kloroform), Xmax = 282 nm (e = 25200). Infravörös színkép (KBr): i>C=0 1710 (lakton), iC=0 1655, i>C=C 1618 és 1590 cm-1 . Elemzési eredmény C19H24O3 képletre (mólsúly: 300,40) vonatkoztatva: számított: C =75,97%, H =8,05%, talált: C = 75,54%, H = 8,10%. 1,5 g 17a-oxa-D-homo-androszta-4,6-dién-3,17--diont és 1,5 g 2,3-diklór-5,6-diciano-l,4-benzokinont 60 ml vízmentes benzolban forralunk 40 órán át. Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot 40g alumíniumoxidból készített oszlopra visszük fel, és 80% etil-acetát: 20% heptán eleggyel eluáljuk az oszlopot, majd az eluátumot vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot acetonból kristályosítva, 0,8 g 17a-oxa-D-homo-androszta-l,4,6-trién-3,17-diont kapunk. Op.: 230-233 C°, [a]D=-96° (c = l, kloroform), Xmax = 223 (e = 10700), 257 (e = 9600), 299 (e = 12400) nm. Infravörös színkép (K-Br): i>C=0 1710 (lakton), vC=0 1660, i;C=C 1605 és 1588 cm' 1. Elemzési eredmény Ci9 H 22 03 képletre (mólsúly: 298,38) vonatkoztatva: számított: C =76,48%, H =7,43%, talált: C = 76,48%, H = 7,44%. 2. példa Fusarium caucasicum (MNG 90) egyhetes, burgonyás ferde agáron nőtt tenyészetéből 10 ml steril vízzel szuszpenziót készítünk, és ennek 1—1 ml-ével oltunk 10 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban sterilezett 100—100 ml alábbi összetételű táptalajt: glükóz 50 g kálium-dihidrogén-foszfát 0,5 g magnézium-szulfát-heptahidrát 2,5 g kálium-nitrát 1 g ammónium-nitrát 10 g 1 liter csapvízben. A táptalaj pH-ját 6,5-re állítjuk sterilezés előtt. A beoltott lombikokat termosztát-szobában 28 C°-on rázatva inkubáljuk 2 napig, majd a kapott tenyészettel beoltunk 20 db 3 literes Erlenmeyerlombikban sterilezett 700—700 ml alábbi összetételű táptalajt: pepton 15 g 5 kukorica-lekvár (szárazanyag) 6 g glükóz 0,05 g 1 liter csapvízben. A beoltott 3 literes Erlenmeyer-lombikokat 10 1 napig 28 C°-on rázatva inkubáljuk, majd 280-280 mg 4-4 ml acetonban oldott androszta-4,6-dién-3,17-diont adagolunk hozzájuk, és 2 napon át folytatjuk az inkubálást. Ezután a fermentlét leszűrjük, és a szűrletet 3 x 1/3 térfogat 15 etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített extraktumot nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot aceton-hexán elegyből kristályosítva 2,83 g az 1. példában leírttal azonos 17a-oxa-D-homo-androszta-l ,4,6-trién-3,17-20 -diont kapunk. 3. példa 25 10 g 17a-oxa-D-homo-androszta-l,4-dién-3,17--diont, 10 g N-bróm-szukcinimidet és 0,5 g benzoil-peroxidot 1,75 liter 6 : 1 arányú széntetraklorid- kloroform elegyben 2 órán át forralunk, majd a reakcióelegyet 12 órán át szobahőmérsékleten állni 3Q hagyjuk. Ezután az oldatból kivált szukcinimidet leszűrjük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk. így 7,5 g 6a-bróm-17a-oxa-D-homo-androszta-l,4-dién-3,17-dion nyers termékhez jutunk. Analitikai tisztaságú 6a-bróm-17a-oxa-D-homo-androszta-l ,4-dién-35 -3,17-diont preparatív rétegkromatográfiás tisztítással kapunk a nyers termékből az 1. példában leírt módon. A kromatográfiásan tiszta terméket dioxán-éter elegyből kristályosítjuk át. Op.: 193-196 C°, [a]D =-85° (c=l, kloro-40 form), Xmax = 242 nm (e = 17 300). Infravörös színkép (KBr): j>C=0 1710 (lakton), vC=0 1660, PC=C 1625 és 1605 cm-1 . Mágneses magrezonancia spektrum (CDCI3): 5C19 -CH 3 1,28, ÔC 18-CH 3 1,41, 5C,-H 7,05, 45 6C2 -H 6,34 (q, J 1)2 = 10Hz), 5C4 -H 6,75 (t, Ja ,4*Í4,6*1.5 Hz)| 5C 6 -H 5,0ppm (J6a>7a = 12Hz, J6a , 7e =4Hz). Elemzési eredmény Ci9 H 23 0 3 Br képletre (mólsúly: 379,31) vonatkoztatva: 50 számított: C =60,17%, H =6,11%, Br = 21,07%, talált: C =60,40%, H =6,21%, Br = 21,30%. 55 7,5 g 6a-bróm-17a-oxa-D-homo-androszi a-1,4-dién-3,17rdion nyers terméket 250 ml kolUdinben forralunk 3 órán át. A kollidines oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, majd jeges 10%-os kénsavra 60 öntjük. A -kapott elegyet etil-acetáttal extraháljuk, az extraktumot vízzel mossuk, majd nátrium-szulfáton szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A bepárlási maradékot acetonból kristályosítva 3,1 g, az 1. példában leírttal azonos 17a-oxa-D-homo-androszta-65 -l,4,6-trién-3,17-diont kapunk. 3
