168206. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-(5-amino-5-karboxi-valeramido)-3-metil-3-cefém- 4-karbonsav előállítására

3 168206 4 10 "a 3 549 628, 3 575 970 és a 3 697 515 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírások szerint a jól ismert foszforpentakloridos hasítási reakcióval végezzük. A 7-amino-dezacetoxi-cefalosporánsav igen értékes köztes vegyület, amelyet acilezve több 7-acilamido-dezacetoxi-cefalosporánsav-származékot, például a cefalexin antibiotikumot állíthatjuk elő. A találmány tárgya eljárás dezacetoxi-cefalosporin C előállítására. A dezacetoxi-cefalosporin C előállítására a találmány szerinti eíjárás értelmében úgy járunk el, hogy a Streptomyces lipmanü (letétbe helyezve NRRL 3584 sorszám alatt) vagy a Streptomyces clavuligerus (letétbe helyezve NRRL 3585 sorszám alatt) mikroorganizmust vizes 15 táptalajon, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük. A dezacetoxi-cefalosporin C-t a többi termelt antibiotikumot is tartalmazó szűrt tenyészléből különítjük el a többi antibiotikummal együtt, majd 20 kromatográfiával választjuk el. Az elkülönített dezacetoxi-cefalosporin C-t cellulózon kivitelezett kromatográfiával tisztítjuk. A találmány szerinti eljárás értelmében a dezacetoxi-cefalosporin C-t a Streptomyces lipmanü 25 NRRL 3584 és a Streptomyces clavuügerus NRRL 3585 tenyésztésével állítjuk elő. Ugy járunk el, hogy a fenti két mikroorganizmus egyikét vizes, felhasználható szén- és nitrogénforrásokat, továbbá szervetlen sókat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, 30 levegőztetett fermentációs körülmények között addig tenyésztjük, míg a táptalajban jelentős mennyiségű antibiotikum halmozódik fel. A Streptomyces Upmanü a dezacetoxi-cefalos- 35 pórin C-n kívül 7-metoxi-cefalosporin C-t is termel, amely utóbbi vegyületet A 16 884 jellel is jelölünk. A Streptomyces clavuligerus a dezacetoxi-cefalosporin C-n kívül 7-(5-amino-5-karboxi-valer- 40 amido)-7-metoxi-3-karbarnoiloxi-metü-3-cefém-4-karbonsavat (A 16Î886I) és 7-(5-amino-5-karboxi-valerami d o ) - 3 -k arbamoüoxi-metil-3-cefém-4-karbonsavat (A 16Í886H) is termel. Bár a dezacetoxi-cefalosporin C-t mindkét or- 45 ganizmus a többi termelt cefalosporinhoz viszonyítva kisebb mennyiségben szintetizálja, ez könnyen elkülöníthető a többi antibiotikumtól és tisztán előállítható a későbbiekben ismertetett kromatográfiás eljárással. A találmány szerinti eljárás során használt mindkét mikroorganizmust délamerikai földmintából izoláltuk. A földminta egy részét steril desztillált vízben szuszpendáltuk, a szuszpenziót agárra (táp-agar) szélesztettük. A beoltott agartenyészeteket több napon át 25 C° és 35 C° közötti hőmérsékleten inkubáltuk. Az inkubációs időszak végén a mikroorganizmusok telepeit sterü platina kaccs segítségével ferde-agarokra oltottuk. A ferde-agár tenyészeteket a dezacetoxi-cefalosporin C 60 termeléséhez szükséges megfelelő inokulum előállítására inkubáltuk. A találmány szerinti eljárás során használt mikroorganizmusok Actinomyces-ek, az International Streptomyces Project [Shirling, és munkatársai, Methods for Characterization of Streptomyces Species, Intern. Bull. Systematic Bacteriol. 16, 313-340 (1966)] Streptomyces fajok jellemzésére vonatkozó követelményeinek megfelelően határoztuk meg őket. A Streptomyces Upmanü NRRL 3584 és a Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 törzsek rendszertani szempontból fontos jellemzőit a következő táblázatokban és bekezdésekben adjuk meg. A táblázatokban megadott színeket az ISCC-NBS módszere szerint (Kelly és munkatársai, ISCC-NBS Method of Designating Colors and a Dictionary of Color Names, U. S. Department of Commerce Circ. 553, Washington, D. C. 1955) határoztuk meg. A zárójelek közé tett sorszámok a Tresner és Backus színskála [Tresner és munkatársai, System of Color Wheels for Streptomyces Taxonomy, Appl. Microbiol., 11, 335-338 (1963)] szerinti színeket jelentik, a színskála jeleit aláhúztuk. A Maerz és Paul szerinti színeket (Maerz és munkatársai, Dictionary of Color, McGraw-Hill Book Co., Inc., New York, 1950) szögletes zárójelek között adjuk meg. A tenyészeteket 30 C° hőmérsékleten 14 napon át tenyésztettük, kivéve, ha másként nem adjuk meg. A Streptomyces lipmanü NRRL 3584 morfológiája A spóratartók rendszerint egyenesek-hajlottak, helyenként hurkok látszanak. A spórák rövidek, hengeres alakúak, méretük 0,5-1,5 M és 1,02-2,5 At között változik, általában 3-10, helyenként 10-50 spórából álló láncokat alkotnak. A spórák felszíne sima, hogy azt az elektronmikroszkópi felvételen látjuk. 1. táblázat A Streptomyces lipmanü nyésztési tulajdonságai NRRL 3584 te-Táptalaj A növekedési jellemzők 50 55 ISP No. 2 (Élesztőkivonat-malátakivonat -agar) ISP No. 3 (Zabliszt-agar) 65 ISP No. 4 (Szervetlen só-oldható keményítő-agar) Közepes növekedés, a hátoldal sötétszürkésbarna [8H9], a légmicélium színe halványsárga (Y) 2 db Közepes növekedés, a hátoldal színe sötétszürkéssárga [13E4] légmicélium közepesen fejlett, színe fehér (W) 13 ba, halványsárga (Y) 2 db. Közepes növekedés, a hátoldal színe barnásszürke [7C7], a légmicélium közepesen fejlett, színe halványsárga (Y) 2 db. 2