168032. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fehérjekészítmények előállítására
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. V. 18. Svájci elsőbbsége: 1972. VII. 12.(10422/72) Közzététel napja: 1975. VIII. 28. Megjelent: 1976. XI. 30. (GI-216) 168032 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/00 C 07 g 7/02 Feltaláló: KRASNOBAJEW Victor biokémikus, Zollikerberg, Svájc Tulajdonos: L. GIVAUDAN ET CIE. Société Anonyme, Genf, Svájc Eljárás fehérjekészítmények előállítására 1 Találmányunk vízben oldhatatlan fehérjekészítmények előállítására vonatkozik. Találmányunk tárgya eljárás fehérje — előnyösen enzim - készítmény előállítására azzal jellemezve, hogy valamely vízoldhatatlan polimer (előnyösen poliamid vagy cellulóz) vagy vízoldhatatlan szervetlen fémoxid, -hidroxid, -amid vagy kovasav, ennek származékai, illetve üveg, valamely aromás diaminnal történő kezelése, majd a reakciótermék diazotálása útján előállított hordozót valamely fehérje — előnyösen enzim - oldattal hozunk érintkezésbe. Az eljárás során a hordozóanyag részecskéit aktív diazonium-csoportokat tartalmazó leoldhatatlan réteggel látjuk el. A találmányunk szerint felhasznált hordozóanyag előállításánál szervetlen anyagként szilikátokat és szilikáttartalmú anyagokat, pl. homokot, köveket, szilikagélt, vagy kovasavgélt, bentonitot, wollastonitot vagy üveget; továbbá fémoxidokat (pl. alumíniumoxidot és hidroxiapatitot) alkalmazhatunk. Polimerként előnyösen poliamidokat és cellulózt, különösen gyapotot (pl. vatta alakjában) alkalmazhatunk. Aromás diaminként előnyösen 1,3-feniléndíamint, 1,2-fenilén-diamint, 4,4, -diamino-difenil-metánt, benzidint és 4,4'-diamino-sztilbént alkalmazhatunk. A találmányunk szerinti eljárásnál alkalmazott hordozók előállításához alapjában bármely aromás diamin felhasználható. A találmányunk szerinti eljárásnál felhasznált hordozóanyag előállításánál a kiindulási anyagként felhasznált részecskéket előbb az amin oldatával kezeljük, előnyösen enyhe melegítés közben. Az ily módon kapott terméket ezután önmagában ismert módon diazotáljuk. A diazotálást pl. nitrittel és savval (pl. 5 sósavval vagy ecetsavval) célszerűen 0 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten végezhetjük el. A találmányunk szerinti eljárásnál a fehérjének a hordozóhoz való rögzítésekor az utóbbit a fehérje . oldatával kezeljük; a fehérje (hordozó súlyarány 10 célszerűen kb. 1—50 mg/g. A kezelést célszerűen valamely puffer-oldatban (pl. foszfát-pufferben) 5-7,8 (előnyösen 7,5) pH-értéken hajthatjuk végre. A találmányunk szerinti eljárásnál a hordozóanyagok előnyösen antigének, antitestek, inhibitorok (pl. 15 tripszin-inhibitorok) és különösén enzimek rögzítésére alkalmazhatók. A találmányunk szerinti eljárással pl. az alábbi enzimekből állíthatók elő oldhatatlan enzim-készítmények: naringináz, hesperidináz, j3-galaktozidáz, 0-glükozidáz, tripszin, broma-20 lin, ficin, papain, a-amiláz, amiloglükozidáz és ureáz. Eljárásunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlá-. toznánk. 25 1. példa 1 g szilikagélt (kromatográfiás célokra szolgáló termék) 200 mg 4,4'-diamino-difenil-metán és 10 ml vízmentes benzol oldatához adunk. Az elegyet 5 percen át időnkénti rázogatás közben vízfürdőn (80 30 °C) a benzol teljes mennyiségének eltávolításáig mele-168032 1
