167998. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-nitro- indán-1,3- dion-származékok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

167998 17 18 (PCA) alkalmaztuk (A. Ovary és 0. E. Bier: Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 81, 584 (1952), J. Goose és A. M. J. N. Blair: Immunology 16, 769 (1969)). Patkányokban Mota módszerével (I. Mota: Immunology 7, 681 (1964)) hőre bomló homocitotróp antitestet tartalmazó szérumot termeltünk. 250-300 g testsúlyú hím Wistar-patkányokat intraperitoneálisan 0,5 ml Bordatella pertussis vakcinával (4X1010 elölt mikroorganizmus/ml) oltottunk be, és az állatoknak szubkután injekcióban 0,5 ml emulziót adtunk be, amelynek összetétele a következő: 100 mg ovalbumin, 2 ml fiziológiás sóoldat és 3 ml nem teljes Freund-adjuváns. A patkányokat a 18. napon szív-punktúrával kivéreztettük, az állatok vérét összegyűjtöttük, a vérszérumot elkülönítettük és.-20 C°-on tároltuk. A szérumot csak a felhasználás előtt olvasztottuk fel. A szérumot 0,9%-os nátriumklorid-oldattal kétszeresére hígítottuk, és ilyen módon hat sorozathígítást végeztünk. Az egyes hígított minták 0,1 ml-ét 250-300 g testsúlyú Wistar-patkányok borotvált hátbőrébe injiciáltuk, a bőr különböző részeibe. 72 óra elteltével az állatoknak intravénás inkejció formájában 0,3 ml 1%-os ovalbumin-oldat és 0,1 ml 5%-os pontamine égszínkék színezék-oldat elegyét adtuk be. (Mindkét oldatot izotóniás sóoldattal készítettük, és az oldatokat Sorensen-pufferrel pH = 7,2 értékre pufferoltuk.) 20 perc elteltével az állatokat leöltük, és megmértük az antitest-injekció helyén kialakuló kék foltok átmérőjét. A szérum hígítását úgy állítottuk be, hogy az immunreakció a legnagyobb hígítású szérum beadásának helyén negatív legyen és maximális reakció a legkisebb hígítású szérum beadásának helyén lépjen fel. Általában hat kétrészes sorozathígítást alkalmaztunk, és az állatoknak az 1/4—1/128 hígítású szérummintákat adtuk be. A hatóanyagok aktivitásának meghatározása során azt vizsgáltuk, hogy a vegyületek milyen mértékben csökkentik a maximálisnál kisebb átmérőjű foltok 5 átmérőjét a kontrollokhoz viszonyítva. A vizsgálatokhoz 6—6 állatból álló állatcsoportokat használtunk fel, és a hatóanyagot az ovalbumin intravénás beadása előtt meghatározott idővel adtuk be az állatoknak. Meghatároztuk a vizsgált állatokon kialakuló kék 10 foltok átmérőit, és az eredményeket összehasonlítottuk a kontrollcsoportba tartozó állatokon észleltekkel. A kontrollcsoportba tartozó 6 állatot azonosan kezeltük, azzal a különbséggel, hogy az állatoknak nem adtunk hatóanyagot. 15 A PCA %-os gátlását az alábbi egyenlettel számítottuk ki: PCA %-os gátlása = (1 - £ ), ahol a = a kísérleti állatcsoportban mért átlagos foltátmé-20 rő azokon a helyeken, ahol a kontrollállatok reakciója kisebb a maximálisnál, és ~" 7 b = a kontrollállatcsoportban mért átlagos foltátmérő azokon a helyeken, ahol az állatok reakciója kisebb a maximálisnál. 25 A hatóanyagot előnyösen 7,2 pH-értékű pufferoldattal készített és nátrium-hidrogén-karbonáttal semlegesített oldat formájában adtuk be. Az oldhatatlan nátriumsót képező vegyületek esetében a következőképpen jártunk el: a szabad savat 2,5 n nátriumhidr-30 oxid-oldattal reagáltattuk, a kivált nátriumsót leszűrtük, vízzel lúgmentesre mostuk, majd szárítottuk, és a száraz sót 1%-os metilcellulózos szuszpenzió formájában adtuk be. A fenti kísérletek eredményeit az 1. táblázatban 35 ismertetjük. 1. táblázat Vizsgált vegyület Adagolás módja Dózis Adagolás és immg/kg munreakció között eltelt idő PCA-reakció %os gátlása 5-bróm-2-nitro-indán-l,3-dion Na-só oldata 5-metil-2-nitro-indán-l,3-dion Na-só oldata 4-metil-2-nitro-indán-l,3-dion Na-só 1%-os metilcellulózos szuszpenziója 4-metoxi-2-nitro-indán-l,3-dion Na-só 1%-os metilcellulózos szuszpenziója 2-nitro-benz(f)indán-l,3-dion Na-só 1%-os metilcellulózos szuszpenziója 4-bróm-2-nitro-indán-l,3-dion Na-só 1%-os metilcellulózos szuszpenziója 25 0 46 25 60 87 100 0 30 100 60 64 25 0 66 25 30 44 100 0 100 100 30 47 25 0 2 25 60 33 100 0 6 100 60 57 25 0 -2 25 60 25 100 0 18 100 60 36 25 0 100 25 60 37 100 0 100 100 60 72 25 0 8 25 60 24 100 0 -A