167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására

167968 27 28 25 ßg tisztított enzimet hozzáadunk 10 ml olyan 6,0 pH-jú 0,05 M foszfát-pufferhez, amely 0,42% 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat és 0,80% D-, L- vagy DL-fenilglicin-metilésztert tartalmaz. Az elegyeket 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a képződött 7-(a-aminofenilacetamido)-3-dezacetoxicefalosporánsav mennyiségét enzimes módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 18. táblázatban ismertetjük. 18. táblázat fenilglicin-metilészter módosulata képződött cefalosporinszármazék mennyisége, mg/ml D DL L 1,7 0,9 0,2 27. példa A 19. táblázatban felsorolt mikroorganizmusok mindegyikének 2 napos kultúrájából egy oltókacsnyit egy 200 ml-es lombikba viszünk, mely 30 ml III tápközeget tartalmaz. A mikroorganizmust 22 órán át tenyésztjük rázás közben 28 °C hőmérsékleten, azután a sejteket centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6,0 pH-jú 0,05 mólos foszfátpufferrel mossuk, azután 3 ml 6,0 pH-jú 0,2 mólos foszfátpufferben szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz hozzáadjuk 150 mg 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav és 325 mg D-fenilglicinmetilészter-hidroklorid 12 ml 6,0 pH-jú 0,2 mólos foszfátpufferrel készített oldatát. A reakcióelegyet 60 percig inkubáljuk rázás közben 37 C°-on. A reakcióelegyben feldúsult terméket, a 7-(a-amino-D-fenilacetamido)-3-dezacetoxicefalosporánsavat (a továbbiakban röviden ,,cefal"exin"-t) biológiai úton azonosítottuk és határoztuk meg. Az eredményeket az alább közvetkező 19. táblázatban mutatjuk be. 19. táblázat Mikroorganizmus A reakcióelegyben feldúsult cefalexin (mg/ml) Xanthomonas campestris NARIX 1-1-1 2,4 Xanthomonas cucarbitae NARIX 1-3-1 4,8 Xanthomonas hyacinthi NARI X 1-4-1 4,4 Xanthomonas phaxeoli f. s. alfalfa NARIX 1-6-1 5,2 Xanthomonas phaseoli f. s. sojense NARI X 1-7-1 4,7 Xanthomonas physalidicola NARIX 1-8-1 6,2 Xanthomonas pisi NARIX 1-9-1 1,8 Xanthomonas translucens NARIX 1-11-2 0,7 10 15 28. példa A 20. táblázatban megadott mikroorganizmusok mindegyikének 3 napos kultúrájából egy oltókacsnyit átviszünk egy 200 ml-es lombikba, amely 30 ml IV tápközeget tartalmaz. A mikroorganizmust 22 órán át tenyésztjük rázás közben 28 C°-on, azután a sejteket centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6,0 pH-jú 0,05 mólos foszfátpufferrel mossuk és 3 ml 6,0 pH-jú 0,2 mólos foszfátpufferben szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz hozzáadjuk 150 mg 7-ámino-3-dezacetoxi-cefalosporánsav és 325 mg D-fenilglicin-metilészter-hidroklorid 12 ml 6,0 pH-jú 0,2 mólos foszfátpufferrel készített oldatát. A reakcióelegyet 37 C°-on inkubáljuk rázás közben 60 percig. A reakcióelegyben feldúsult cefalexint biológiai úton azonosítottuk és határoztuk meg. Az eredményeket az alább következő 20. táblázatban közöljük. 20. táblázat 20 25 30 Mikroorganizmus A reakcióelegyben feldúsult cefalexin (mg/ml) Pseudomonas aureofaciens IFO-3522 0,2 Pseudomonas convexa IFO-12 653 0,05 Pseudomonas putrefaciens IFO-39Q8 0,3 Pseudomonas teatrolens IFO-12 691 1,2 3 5

Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az (I) általános képletű cefalosporin-származékok előállítására, ahol R adott esetben hidroxilcsoporttal, halogénatommal, rövidszénláncú alkil-, 40 alkoxi-, karboxil-, merkapto-, ciano-, nitro-, szulfo-, amino-, szulfamino- és/vagy karboxi-rövidszénláncúalkil-csoporttal szubsztituált hattagú homociklusos szénhidrogén-csoportot vagy 1 heteroatomot tartalmazó öttagú heterociklusos csoportot, R' hidrogén-45 atomot, rövidszénláncú alkoxi-, alkoxikarbonil-, piridinium, l-oxidopirid-2-il-tio-, metiltiokarboxi-, dimetil-ditio-karbamil-, trimetilamino-, azido- vagy benziloxi-karbonil-amino-csoportot jelent, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű a-szubsztituált a-ami-50 nosavat, ahol R jelentése a fenti, vagy annak egy karboxilcsoporton képzett származékát egy (III) általános képletű 7-amino-cefém-származékkal, ahol R' jelentése a fenti, reagáltatjuk egy olyan mikroorganizmus tenyészete vagy az abból kinyert enzimtartalmú 55 anyag jelenlétében, mely mikroorganizmus ml-enként 10 mg D-fenüglicin-metilésztert és 5 mg 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat tartalmazó 6,0 pH-jú vizes oldatban szuszpendálva és 30 percig rázás közben 37 C°-on inkubálva legalább 1 mg/ml koncentrációjú 60 7-(a-amino-D-fenüacetamido)-3-dezacetoxicefalosporánsav képződését idézi elő, előnyösen az alábbi mikroorganizmusok valamelyikét alkalmazva: Mycoplana dimorpha (IFO-13213), Mycoplana bullata (IFO-13267), Protaminobacter alboflavus (IFO-65 13221), Acetobacter acetosus (IF0-3296), Glucono-14