167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására

167968 23 '2

4 mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 3 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 3 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% fenilglicin-metilésztert és 2% 14. táblázat szerinti 7-aminocefém-származékot tartalmaz. Az oldat pH-ját 5 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyeket rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett cefalosporinszármazékokat bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációjukat biológiai módszerrel meghatározzuk. A 10 kapott eredményeket a 14. táblázatban adtuk meg. 14. táblázat 7-aminoképződött Mikroorganizmus cefémcefalosposzárma-rin-származék zék Xanthomonas oryzae IFO-3288 (e) 6,8 mg/ml T Acetobacter pasteurianus IFO-3223 (0 5,6 mg/ml U Megjegyzés: e: N-(7-amino-3-cefém-3-il-metil)-piri- 25 dinium-4-karboxilát. f: N-7-amino-3-cefém-3-il-metil)-4-karboxamido-piridinium-4-karboxilát. T: N-[7-(a-aminofenilacetamido)-3-ce- 30 fém-3-il-metil]-piridinium-4-karboxilát. U: N-[7-(űí-aminofenilacetamido)-3-ce-fém-3-il-metil]-4-karboxamidopiridinium4-karboxüát. 35 20. példa Acetobacter xylinum IFO-3144 és Xanthomonas IFO-3835 3 napos tenyészetét 30 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°-on 40 rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6,0 pH-jú 0,05 N foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 3 ml-ében szuszpendáljuk. A Xanthomonas-sejtek szuszpendálására 75 ml puffert alkalmazunk. A szuszpenzióhoz térfogatával 45 megegyező mennyiségben olyan vizes 0,1 N dikáliumhidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 0,4% fenü-glicint és 0,2% 7-amino-cefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavval előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyeket rázás közben 30 percen 50 keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett 7-{a-aminofenüacetamido)-cefalosporánsavat („A" jelű vegyület) bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 15. táblázatban adjuk meg. 55 15. táblázat •^i. - ,. „ ,.— •••-. ii,. i • ,r ím n •*••-. -li "i .'» »<t i " •••••! a képződött „A" Mikroorganizmus vegyület mennyi 60 sége mg/ml Acetobacter xylinum IFO-3144 0,04 Xanthomonas citri IFO-3855 0,06 21. példa Xanthomonas citri IFO—3835 1 napos tenyészetét 30 ml III, tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott tenyészetet 500 ml III. tápközegbe oltjuk át és a közeget 24 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, és 20 ml 6,5 pH-jú 0,2 M trisz-maleát pufferoldatban szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 20 ml olyan fenti pufferoldatot adunk, amely 500 mg fenilglicin-metilésztert, 250 mg 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat és 10 ml acetont tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavval előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 25 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett cefalosporin-származékot bioautográfiával azonosítjuk és a koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A fenti idő eltelte után a reakcióelegy 270 mg 7-(a-aminofenilacetamido)-3-dezacetoxicefalosporánsavat tartalmaz. 22. példa Acetobacter species IFO-13209-t átoltunk 200 ml IV. tápközegbe, majd a közeget rázás közben 22 órán keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 20 ml 0,1 M 6,0 pH-jú foszfátpuffer-oldatban szuszpendáljuk és a szuszpenziót 8 részre osztjuk, amely részek 75 mg 16. táblázatban megadott fenilglicin-származékot és 25 mg 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat tartalmaznak. A kapott elegyet rázás közben 1 órán keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a képződött 7-(a-aminofenilacetamido)-3-dezacetoxi-cefalosporánsavat („B" jelű vegyületet) bioautográfiával azonosítjuk és mennyiségét biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 16. táblázatban foglaltuk össze. 16. táblázat Kiindulási anyagként alkalmazott Keletkezett fenilglicin-észter „B" vegyület mennyisége mg/ml Metilészter 6,0 Etilészter 6,0 n-Propilészter 4,6 Izopropilészter 2,2 Tercier butilészter 0,2 Benzilészter 4,2 Fenilglicinamid 0,2 N<fenüglicil)-glicin 0,2 23. példa Xanthomonas oryzae IFO—3510 1 napos tenyészetét 50 ml III. tápközegbe oltjuk át, majd a közeget rázás közben 1 napon keresztül 28 Cc-on

inkubáljuk. Ezután a tenyészettel 350 ml III. közeget inokulálunk és a közeget 1 napon keresztül 28 C°-on rázatjuk. A fentiek szerint készített 800 ml tenyészetből a sejteket centrifugálással elkülönítjük és 200 ml 6,0-os pH-jú 0,2 M foszfátpuffer-oldatban szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz hozzáadunk 200 ml olyan 6,0 pH-jú 0,2 M foszfátpuffert, amely 3 g DL-1-ciklohexenilglicin-metilésztert és 1 g 7-amino-3-dezacetoxicefalospo-12