167786. lajstromszámú szabadalom • Továbbfejlesztett eljárás rifamicin B mikrobiológiai előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 167786 MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG Qf Bejelentés napja: 1973. V. 4. (LE—698) Bejelentés elsőbbsége: Olaszország: 1972. V. 5. (23 926 A/72) Nemzetközi osztályozás: C 12 d 9/14 C 07 d 99/04 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1975. VII. 28. Megjelent: 1977. II. 28. ' 1, N f \ \ J Feltalálók: White Richard John vegyész, Como, Lancini Giancarlo vegyész, Pavia, Olaszország Tulajdonos: Gruppo, Lehetit S.p.A., Milánó, Olaszország Továbbfejlesztett eljárás rifamicin B mikrobiológiai előállítására A találmány tárgya továbbfejlesztett eljárás rifamicin B előállítására mikrobiológiai úton. A rifamicin B és rifamicin-komplex (rifamicin A, C, D és E) előállítását a 877 732 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás ismerteti. További, a rifamicin B kémiai átalakításával nyert származékokat ismertet a 965 019 sz. nagy-britanniai és 496 730 sz. svájci szabadalmi leírás, míg a 2 043 847 számú francia szabadalmi leírás szintén rifamicin B előállítását ismerteti, azonban jelentős mennyiségű rifamicin 0 keletkezése mellett, Streptomyces tolypophorus vagy valamely mutánsának fermentációjával. Ismeretes, hogy ha a Streptomyces mediterranei-t általánosan használt táptalajon tenyésztik, a tenyészlében rifamicin típusú antibiotikumok halmozódnak fel (Sensi és munkatársai: Antibiotics Annual, 262. oldal, 1959—1960). Margalith és Pagani [Applied Microbiology, 9, 325 (1961)] úgy találta, hogy ha a táptalajt nátrium-dietilbarbituráttal egészítik ki, úgy kizárólag rifamicin B szintetizálódik. Ugyanakkor, a barbiturátok adagolása például az üzemi méretekben végzett fermentációk önköltségének emelkedése és a termelő organizmusnak esetenként az antibiotikum-szintézis csökkenéséhez vezető gyengébb növekedése miatt előnytelen. A találmány olyan mutáns Streptomyces mediterránéi sugárgomba izolálásán alapul, amely organizmus függetlenül attól, hogy a tenyésztő 10 15 20 25 30 táptalaj tartalmaz-e nátrium-dietilbarbiturátot vagy nem, kizárólag rifamicin B-t szintetizál. A rifamicin B-t termelő mikroorganizmust a következőképpen izoláltuk: a Streptomyces mediterránéi ATCC 13 685 jelű sugárgomba spóraszuszpenzió j ához N-metil-N'-nitrozo-N-nitroguanidint adtunk (1 mg/ml). A spóraszuszpenziót 9,0-es pH-jú trisz-hidroximetil-aminometán pufferral készítettük. A kezelést 28 °C hőmérsékleten 60 percen át végeztük. A mutagen hatású vegyülettel kezelt spórákat mosás után Benett-agart tartalmazó Petri-csészékbe szélesztettük. Ezt követően 28 °C hőmérsékleten 14 napon át inkubáltuk a tenyészeteket, majd a kezelést túlélő telepeket ferdeagarra oltottuk és megvizsgáltuk, vajon nátrium-dietilbarbituráttal vagy anélkül képesek-e rifamicin B-t szintetizálni? A munkát azokkal a mutánsokkal folytattuk, amelyek nátrium-dietilbarbiturát jelenléte nélkül is nagy mennyiségű rifamicin B-t termelnek. Az egyik ilyen mutánst M 18 jellel jelöltük, és letétbe helyeztük az USA nemzeti törzsgyűjteményébe, ahol az ATCC 21 789 jelet kapta. Jellemző tulajdonságait a későbbiekben részletesen ismertetjük. A többi elkülönített, előnyös tulajdonságú variáns az M 18 jelű törzstől csak kis mértékben tér el, leírásuk lényegében az 1. és 2. táblázatban megadottakkal azonos. 167786 1