167658. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a metanobaktériumos fermentáció B12-vitamin hozamának növelésére
7 167658 8 sörélesztőhidrolizátun i20%-os (szárazanyagtartalom: 20--30%, összes N: 43-47%) 1,0 ml kobaltklorid 0,010g borostyánkősav 0,006 g o-xilidin 0,020 g magnéziumklorid 0,1 g metanol 60,0 ml A fenti összetételű táptalajba folytatólag a 159 356 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint 0,006 g 5,6-dimetilbenzimidazolból és 7,0 g IQ kukoricalekvárból (szárazanyagtartalom: 55—60%, összes N: 3-4%) előzetesen előállított vízoldható komplexet adagolunk be. A fenti táptalaj lényegében ammónium-nitrogénből és metanol-szénből származó nitrogén és szén súlyaránya 1:11. 15 A fenti táptalaj beadagolása után a fermentlevet alaposan összekeverjük, majd a fermentort gumilappal lezárjuk és 32-34 C°-os termosztátba helyezzük. Ezután a fermentorba naponta felkeverés közben fermentlé elvétel nélkül 6 napon át 100-100 ml 20 28-30 C°-os csapvízben oldott, a fenti táptalajkomponenseket tartalmazó csapvizet adagolunk be. Az inkubációs idő 5-6 nap attól függően, hogy a betáplálás kezdetén a fermentlé összes nitrogén és szén koncentrációja mennyi volt. 25 A hetedik napon — amikor a fermentlé térfogata 10 liter - a fermentációt félfolyamatossá alakítjuk át oly módon, hogy a fermentlevet alaposan felkeverjük, majd össztérfogatának 1/10 részét elvesszük. A fermentlé aliquot részéből Kjeldahl módszerrel meghatá- 30 rozzuk annak összes nitrogén tartalmát és Peters-Gutman módszerrel [Anal.Chem. 25, 987 (1953] az összes szén tartalmát. Az elemzés alapján az összes nitrogén tartalom (Np0) 2025 mg/l, az összes széntartalom (Cpö) 7310 mg/l. A fermentorba az elemzés 35 alapján az elvett fermentlével azonos térfogatú, azaz 1 liter 28-30 C°-on csapvízben oldott, friss táptalajt adunk be, amelynek tápanyagtartalmát úgy állítjuk be, hogy az ammóniumsók ammónium-nitrogén tartalma és a metanol-szén tartalom a fermentlével elvett 40 nitrogén, illetőleg szén mennyiségének feleljen meg. Az elvett 2025 mg/l nitrogén pótlására a csapvízhez az alábbi tápanyagokat adjuk: ammóniumhidrogénkarbonát 6 g ammóniumhidroxid 24%-os 2 ml 45 diammóniumhidrogénfoszfát 0,6 g ammóniumszuflát 2,0 g Az elvett 7310 mg/l szén mennyiségének pótlására 80 ml metanolt adunk a csapvízhez. A csapvízhez még az alábbi tápanyagokat adjuk: 50 sörélesztőhidrolizátum 20%-os 1,0 ml kobaltklorid 0,025 g borostánykősav 0,006 g o-xilidin 0,020 g magnéziumklorid 0,1 g 55 A táptalajba folytatólag beadagolunk a 159.356 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint 0,015 g 5,6-dimetilbenzimidazolból és 9 g kukoricalekvárból előzetesen előállított vízoldható komplexet. A csap- 60 vízhez adott összes táptalajkomponens beadagolása után az ily módon előkészített táptalaj ammónium -nitrogénből és metanol-szénből származó nitrogén: :szén súlyaránya 1:12. A fermentlé alapos felkeverése után a fermentort 65 gumilappal lefedjük. A fermentlé elvételt és a táptalaj betáplálást a fenti módon 24 óránként megismételjük. 4 A naponta elvett fermentleben a Bi2-vitamint a megadott módon meghatározzuk. A fermentlé 20 460 jug/1 Bla -vitamint tartalmaz. A B12 -vitaminnal egyenlő biológiai értékű III. faktorral kiegészített érték 24 660 /Ltg/1. A fermentlé Bi2-vitamin tartalom növekedése a kiindulási 10 500 jug/1 szinthez viszonyítva 194,8%. 2. példa 1 literes kísérleti üvegfermentorba 930 ml 11 250 Mg/l Bi2 -vitamin tartamú, a 159.356 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerinti félfolyamatos eljárással készített, az 1. példában megadott mezofil metántermelő vegyes mikropopulációt tartalmazó üzemi fermentlevet töltünk. A fermentléhez 10 ml 28—30 C°-os, az alábbi táptalajkomponenseket tartalmazó csapvizet adunk: ammóniumhidrogénkarbonát 0,6 g ammóniumhidroxid 24%-os 0,2 ml diammóniumhidrogénfoszfát • 0,06 g ammóniumszulfát 0,2 g sörélesztőhidrolizátum 20%-os 0,1 ml kobaltklorid 0,001 g borostyánkősav 0,0006 g ox-xilidin 0,002 g magnéziumklorid 0,01 g metanol 9,0 ml A fenti összetételű táptalajba folytatólag a 159.356 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint 0,006 g 5,6-dimetilbenzimidazolból és 0,9 g kukoricalekvárból előzetesen előállított vízoldható komplexet adagolunk be. A fenti táptalaj lényegében ammónium-nitrogénben és metanol-szénben kifejezett nitrogén szén súlyaránya 1:13. A továbbiakban 6 napon át az 1. példában leírt módon járunk el, azzal a változtatással, hogy a fermentléhez naponta 10-10 ml 28-30 C°-os csapvízben oldott, a fenti mennyiségű tápanyagkomponenseket tartalmazó táptalajt adjuk be. A hetedik napon a fermentációt félfolyamatossá alakítjuk át oly módon, hogy a fermentlevet alaposan felkeverjük, majd össztérfogatának 1/10 részét elvesszük. A fermentlé aliquot részéből meghatározzuk annak összes nitrogén és szén tartalmát. Az elemzés alapján az összes nitrogéntartalom (Npö) 2570 mg/l, az összes széntartalom (Cp0) 8640 mg/l. A fermentorba ezután az elvett fermentlével megegyező térfogatú csapvízben oldott alábbi tápanyagokat adjuk be: ammóniumhidrogénkarbonát 0,6 g ammóniumhidroxid 24%-os 0,2 ml diammóniumhidrogénfoszfát 0,06 g ammóniumszulfát 0,2 g sörélesztőhidrolizátum 20%-os 0,1 ml kobaltklorid 0,0025 g borostyánkősav 0,0006 g o-xilidin 0,002 g magnéziumklorid 0,01 g metanol io,0 ml A táptalajba folytatólag beadagolunk 0,0015 g 5,6-dimetilbenzimidazolból és 0,9 g kukoricalekvárból előzetesen előállított vízben oldódó komplexet. Az összes táptalajkomponens beadagolása után a táptalaj ammónium-nitrogén és metanol-szén aránya 1:14. A továbbiakban az 1. példa szerint járunk el. A hetedik napon elvett fermentleben meghatározzuk a B12-vitamint. A fermentlé 24200 jug/1 Bi2 -vi-
