167656. lajstromszámú szabadalom • Abszorpciometriás eljárás 1-fenil-1,3,8-triazaspiro (4,5) dekán-4-On- ésN-szubsztituált származékainak meghatározására
3 167656 4 csökken. A leolvasást ezért a nátrium-nitrit-oldat hozzáadásától számított 15—20 perc között célszerű elvégezni. A reakció az általunk vizsgált 5—120 mikrogramm hatóanyag/reakcióelegy ml koncentráció-zónában igen jól követi a Beer-Lambert törvényt. A vizsgálatot 9 ml reakció-elegyben végeztük. A reakció relatív standard deviációja — 1 törzsoldatból, 11 mérésből számolva - ± 1,8%, tehát a módszer jól reprodukálható. A találmány szerinti meghatározási módszer előnye, hogy az l-fenil-l,3,8-triazaspiro[4.5]dekán-4-on vagy valamely N-szubsztituált származékának készítményekből történő meghatározása esetén a mérés a hatóanyag izolálása nélkül, például a mikrokristály-szuszpenziós injekció egyszerű feloldása után közvetlenül elvégezhető, mert a mérést az injekciós oldat segédanyagai nem zavarják; a módszer tehát a meghatározandó vegyületre nézve specifikus. További előnyt jelent, hogy a szuszpenzió szilárd fázisát képező hatóanyag szűrését, szárítását és mosását nem kell elvégezni, és így nemcsak a vizsgálatok elvégzésének ideje lesz rövid, hanem több hibaforrás is kiküszöbölődik. Módszerünk tehát gyors, pontos és kivitelezése egyszerű, így tehát különösen alkalmas rutin-mérésekre, illetve ellenőrzésekre. Ez utóbbiak közé tartozik a mikrokristály-szuszpenziós injekciók homogenitásának ellenőrzése, ami nagyszámú egyedi mérés elvégzését kívánja meg, és ezért erre a célra a találmány szerinti eljárás különösen alkalmas. Speciális ellenőrzési feladatot jelent a mikrokristály-szuszpenziós injekciónál a szuszpenzió oldatos fázisában az esetlegesen beoldódott hatóanyag-mennyiségének mérése. Mivel a leírt módszer az l-fenil-l,3,8-triazaspiro [4.5]dekán-4-onra és N-szubsztituált származékaira nézve specifikus, az eljárás a fenti feladatok megoldására is jól alkalmazható. A találmány szerinti meghatározási módszer előnyösen alkalmazható az l-fenil-l,3,8-triazaspiro [4.5]dekán-4-on valamely N-szubsztituált származékára vonatkozó szintézis intermedierjeinek meghatározására, ezért alkalmas a gyártástechnológia felülvizsgálatára, illetve a gyártás rendszeres ellenőrzésére. A találmány szerinti eljárás kivitelét az alábbi példák szemléltetik; 1. példa 8-[4,4-bisz(p-fluorfenil)-butil ] -1 -fenil-1,3,8-triazaspiro [4.5]-dekán-4-ont tartalmazó mikrokristályszuszpenziós injekció hatóanyagának meghatározása. Szükséges vegyszerek: metanol analitikaüag legtisztább minőségben 10%-os sósav-oldat nátrium-nitrit analitikaüag legtisztább minőségben Reagens: Frissen készített 5%-os vizes nátrium-nitritoldat. A mérendő oldat elkészítése: Az injekciós tartály tartalmát gondosan összerázzuk, homogenizáljuk, és ebből 5,00 ml-t 100 ml-es mérőlombikba pipettázunk. A szuszpenziót metanolban feloldjuk, majd ugyancsak metanollal jelig töltjük és homogenizáljuk. Az így elkészített oldat 100 mcg/ml 8-[4,4-bisz (p-fluorfenil)-butil] -l-fenil-l,3,8-triazaspiro [4.5]dekán-4-ont tartalmaz. A standard 8-[4,4-bisz(p-fluorfenil)-butil] -1-fenil-1,3,8-triazaspiro [4.5] dekán-4-on-oldat készítése: A megfelelő minőségű 8-[4,4-bisz (p-fluorfenil)-butil] -l-fenil-l,3,8-triazaspiro [4.5]dekán-4-on alapanyagból pontosan ismert koncentrációjú, kb. 100 mcg/ml -es oldatot készítünk metanollal. A mérés menete: 5 2,00—2,00 ml mérendő illetve standard-oldatot célszerűen 25 ml-es mérőlombikba (vagy kis Erlenmeyer-lombikokba) pipettázunk, majd hozzáadunk 1,00 ml metanolt, 3,00 ml 10%-os sósavat és homogenizáljuk. Ezután 3,00 ml 5%-os nátrium-nitritoldatot adunk 10 hozzá és a nyitott edényben óvatosan összerázzuk (az összerázást a keletkező salétromossav, valamint nitrogénoxidok által előidézett gázfejlődés és habzás miatt kell óvatosan végezni). A gázbuborékok kiűzése céljából a leolvasásig még több ízben enyhén rázogatjuk a 15 reakció-elegyet. A nátrium-nitrit hozzáadásától számított 15—20 perc között a zöldessárga színű oldatok extinkcióját leolvassuk; vagy U.V.-spektrofotométeren 420 run -nél, vagy Pulfrich-fotométeren S42-es szűrőt alkal-20 mázva, 1 cm-es küvettában olyan vak (üres) kísérlettel szemben, mely a vizsgálandó oldat helyett is metanollal, azzal egyidejűleg és azonos módon készül. Célszerű a standard és vizsgálandó oldat-higításokból 3—3 színreakciót készíteni, és ezeket felváltva 25 mérni. 2. példa 3Q l-fenil-l,3,8-triazaspiro [4.5]dekán-4-on meghatározása. A fenti anyagból pontosan ismert, kb. 100 mcg/ml koncentrációjú metanolos oldatot készítünk, a továbbiakban az 1. példában leírtakat értelemszerűen alkalmazzuk. 35 3. példa Etil-(3-hidroximetil) -4-oxo-l-fenil- 1,3,8-triaza-40 spiro [4.5] dekán-karboxilát meghatározása. A fenti anyagból pontosan ismert, kb. 100 mcg/ml koncentrációjú metanolos oldatot készítünk, a továbbiakban az 1. példában leírtakat értelemszerűen alkalmazzuk. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az l-fenil-l,3,8-triazaspiro [4.5]dekán-4-on és N-szubsztituált származékainak abszorpcio-50 metriás meghatározására azzal jellemezve, hogy az l-fenil-l,3,8-triazaspiro [4.5]dekán-4-ont vagy valamely N-szubsztituált származékát vízzel elegyedő rövid szénláncú alifás alkoholban vagy ilyen alkoholok elegyében feloldjuk, a kapott oldatot a fenti 55 oldószerek vagy oldószerelegyek bármelyikével — célszerűen a feloldásnál alkalmazott oldószerrel vagy oldószereleggyel — a mérési koncentrációig tovább hígítjuk, majd in statu nascendi salétromsavval reagáltatjuk, és a képződött zöldessárga színt fotometrál-60 juk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy oldószerként metanolt alkalmazunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 65 módja azzal jellemezve, hogy a mérést 5-120 mikrogramm hatóanyag/reakcióelegy ml koncentrációzónában végezzük. 2
