167630. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcina és szérum előállítására sertések és borjak enterális coli-megbetegedései ellen
167630 Az ártalmatlansági próbát 5 darab 25—30 napos, 5—10 kg-os malacon végezzük 2 ml oltóanyag izomba fecskendezésével. Megfigyelési idő 3 nap: ezalatt az idő alatt, főleg az oltást követő 24 órában enyhe fokú bágyadtság, hőemelkedés, étvágytalanság, esetleg enyhe hasmenés jelentkezhet. Súlyosabb reakció esetében az oltóanyag felhasználásra nem alkalmas. A találmány szerinti szérumtermelési eljárás a fenti módon előállított, enterotoxint tartalmazó oltóanyag hiperimmunizáló sorozatoltásain alapszik. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy sertéseknek vagy borjaknak a fenti módon előállított vakcinával sorozat-oltásokat adunk, majd az állatokat elvéreztetjük és vérsavójukat konzerválószerrel, előnyösen fenollal konzerváljuk. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina előnye, hogy a vakcinával történő megelőző oltás az állatokban enterotoxin elleni immunitást hoz létre, amely a beoltott állatok túlnyomó részét megvédi a betegségtől vagy igen durva takarmányozási és tartási hiba fennforgásakor a betegség lefolyását enyhévé teszi, és elsőízben teszi lehetővé, hogy a betegség ellen megbízható módon védekezzünk. A vakcina előállítása egyszerű, a fertőzés továbbvitele szempontjából veszélytelen, mert elölt csírákat tartalmaz és vizsgálataink szerint az állatok egészségét nem károsítja. A vakcina alkalmazása az állatorvosi gyakorlatban könnyen keresztülvihető. A találmány szerinti módon előállított hiperimmun szérum enterotoxin elleni hatóanyagai révén a betegségben szenvedő állatok többségét meggyógyítja. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 1. példa Vakcina előállítása Az Országos Közegészségügyi Intézetben 1973. október 9-én 00115 szám alatt letétbe helyezett törzsből húslevestenyészetet készítünk. A 24 órás levestenyészet 3 ml-ével beoltjuk az alábbi összetételű, Kolle-edényekbe, fejtett táptalajt: proteose pepton, Difco Nad marhahúskivonat agar-agar glükóz desztillált víz A táptalajt 24 órán át 37 C°-ón inkubáljuk, majd az edények tartalmát összegyűjtjük és Sorwall gyártmányú Omnimixerrel homogenizáljuk. Ezután az ellenőrző vizsgálatokra mintát veszünk és a megmaradó részt 10%-os formaldehid-oldattal kezeljük (0,2% végkoncentráció). Az így kezelt anyagot 24 óráig szobahőmérsékleten tartjuk, majd üvegekbe fejtjük és a felhasználásig hűtőszekrényben tároljuk. 10 15 20 25 30 35 40 10 g 5g 10 g 3g 2g 1000 ml 45 2. példa Szérum előállítása 60—80 kg-os sertéseket az 1. példa szerinti módon előállított vakcina 5 ml-ével izomba oltunk és 5 napig várunk az esetlegesen fellépő túlérzékenység felderítése céljából. Ezután a sertéseket 4 napos időközökben 10—10 ml vakcinával háromszor beoltjuk, majd 1 hét szünet következik és az oltás-sorozatot 10—10 ml vakcina felhasználásával háromszor 1—1 hét szünet közbeiktatásával megismételjük (4x4 oltás á 10 ml). A vakcinát két helyre elosztva fecskendezzük. Az utolsó oltás után 1 hét múlva az állatokat elvéreztetjük és vérsavójukat a szokásos módón, 0 5%-os fenololdat segítségével konzerváljuk. A szokásos sterilitási próba elvégzése után a hatékonysági próbát úgy végezzük, hogy 8 ml savót 8 ml szűrt, hőálló enterotoxinnal, illetve 6 ml savót 2 ml hőérzékeny enterotoxinnal keverünk, a keveréket 1 óráig szobahőmérsékleten állni hagyjuk és utána 12—15 kg-os süldők duodenum kacsába fecskendezzük. A szérum akkor megfelelő, ha az alkalmazott enterotoxin szegment tágító hatását 50%-kal vagy annál nagyobb mértékben csökkentette. A termelt szérumoktól megköveteljük, hogy 10— szeres hígításuk a termeléshez használt törzs élő tenyészetét tárgylemezen agglutinálja és a savó O-agglutinációs titere főzött antigénnel csőben 1:1000 feletti legyen. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina és szérum hatékonyságát az alábbi kísérleti eredményekkel szemléltetjük. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina hatékonyságát 634 darab, 25—30 napos sertésen és a szérum hatékonyságát 23 darab sertésen vizsgáltuk. A vakcinázási kísérletek eredményeit az alábbi 1. táblázatban adjuk meg. Malacokon végzett immunizálási kísérletek 1. táblázat Kezelés Vakcinatermelésre Vakcina Kísérlethez Coli-hasmenésben használt (ml) használt megbetegedett törzs malacok száma malacok száma 1. csoport 0141 3 51 2 Vakcinával oltott malacok 1. csoport — — 251 52 Oltatlan kontroll II. csoport 0141 (100 db) 2 220 5 Vakcinával 0149 (120 db) oltott malacok II. csoport — — 112 29 Oltatlan kontroll 3
