167616. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusellenes hatású komplex előállítására

21 167616 22 10. példa A 9. példában leírt módon, a kloroformos kivonatból kapott 4,46 g maradékot 400 ml oly metanolban oldjuk, amelyhez előzőleg 4 ml tömény sósavat adtunk. A kapott oldatot szobahőmérsékleten 40 óra 5 hosszat állni hagyjuk, majd 35 ml térfogatra bepároljuk és 35 ml vizet adunk hozzá. Az elegyet 60—80 °C forráspont-tartományú petroléter és toluol 2:3 arányú elegy ének 2 x 20 ml-ével extraháljuk, a szerves oldószerelegyes kivonatokat, valamint a vizes fázisban 10 maradt némi nem oldódó anyagot kiselejtezzük és a visszamaradó vizes fázist kloroformmal extraháljuk. Ezt a kloroformos kivonatot bepároljuk és a maradé kot, amelynek súlya 2,3 g, két egyenlő részre osztjuk. Az egyik, 1,15 g súlyú részt dezaktizált szilikagé- 15 len kromatografáljuk, az alábbi táblázatban összefoglalt eredménnyel: Frakció sz. Oldószer Oldószerítérfogat, ml Toluol-etilacetát 1:1 370 Kloroform 480 Kloroform 870 A 3. frakcióból kapott maradékot acetonból átkristályosítjuk és így dezacetil-A-szirodezmint kapunk, amely 199—201 °C-on olvad. A fent leírt módon kapott nyers termék másik részét közvetlenül átkristályosítjuk acetonból; ily módon is dezacetil-A-szirodezmint kapunk, amely 198-201 °C-on olvad. 11. példa Az 1. példában leírt módon elkészített tápközeget vizes 10 n kálium-hidroxid-oldat hozzáadásával 5,6 pH-értékre állítjuk be, majd autoklávban, 0,67 atm túlnyomáson 25 percig sterilizáljuk. 500 ml-es kúpos lombikokba 150 ml fenti tápközeget töltünk be és forgó rázóberendezésben, 25 °C hőmérsékleten 4 napig inkubáltatjuk Sirodesmium diversum C.M.I. 102.519 kultúrával. 4 nap múlva 12 ml adagokat veszünk ki ezekből a lombikokból és ezekkel az inokulum-mennyiségekkel további ugyanilyen nagyságú lombikokba ugyanilyen mennyiségű és minőségű tápközeget oltunk be. A fent megadottal egyező feltételek mellett 12 napig folytatjuk a fermentációt, majd a lombikokban képződött fermentlevet feldolgozzuk. A lé szűrletét (lombikonként kb 50 ml) 6,0 pH-értékre állítjuk, majd saját térfogata felének megfelelő térfogatú kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonatokat egyesítjük és bepároljuk; maradékként a nyers vírusellenes komplexet kapjuk. 12. példa Ali. példa szerinti módon elkészített és beállított tápközeg l-l liter adagjait kétliteres kúpos lombikokba adagoljuk; a Sirodesmium diversum C.M.I. 20 25 45 "102.519 kultúrával beoltott lombikokat 25 °G hőmérsékleten, forgó rázóberendezésben 3 napig inkubáltatjuk, majd az így kapott inokulum-kultúra 3—3 literes adagjaival 30—30 liter alábbi összetételű tápközeget öltünkbe: glicerin 40,0 g nátrium-nitrát 2,21 g kálium-dibidrogén-foszfát 5,0 g magnézium-szulfát-heptahidrát 1,0 g desztillált vízzel feltöltve 1,0 literre. Beoltás előtt a tápközeget autoklávban, 1 atm túlnyomáson 25 percig sterilizáljuk. A sterilizált tápközeg pH-értéke 4,9, ezt nem módosítjuk. Az üvegből és rozsdamentes acélból készített 40 literes fermentorokba töltött tápközeget beoltás után steril levegővel szellőztetjük 15 liter/perc befúvatási sebességgel; a fermentor tartalmát négylapátos keverő-turbinával, percenként 380 fordulattal keverjük (terelőlapokat a fermentorban nem alkalmazunk). A szükséghez képest „propilénglikol 750" habzásgátlószert adagolunk a fermentorba. 15 nap múlva a fermentlé pH-értéke 6,7; ezt 6,0-ra állítjuk, a fermentációs levet leszűrjük és kloroformmal extraháljuk. A kloroformos kivonat bepárlása útján kapjuk a nyers komplex vírusellenes hatóanyagot. 13. példa 30 0,083 g A-szirodezmint feloldunk 1 ml tömény sósavat tartalmazó 100 ml metanolban, majd az oldatot sötétben szobahőmérsékleten 4 napig állni hagyjuk, azután 20 °C alatti hőmérsékleten szárazra pároljuk. A maradékhoz metanolt adunk és újból 35 bepároljuk a sósav utolsó nyomainak eltávolítása céljából. A maradékot preparatív vékonyréteg-kromatográfiával, „G.F." szilikagél-lemezen tisztítjuk; oldószer-rendszerként kloroform, metanol és hangyasav 95:4:1 arányú elegyét alkalmazzuk. A kapott 40 terméket etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk; az így kapott dezacetil-A-szirodezmin 198-201 °C-on olvad. 14. példa 0,15 g A-szirodezmin és 0,078 g trifenil-foszfin kloroformmal készített oldatát szobahőmérsékleten 4 óra hosszat állni hagyjuk, majd szárazra pároljuk. A 50 kapott maradékot preparatív vékonyréteg-kromatográfiával, „G.F." szilikaaél lemezen tisztítjuk, oldószerrendszerként kloroform, metanol és hangyasav. 95:4:1 arányú elegyét alkalmazzuk. Ily módon szirodezminmonoszulfidot kapunk, gél alakjában, amely etilace-55 tátos oldatból petroléterrel történő kicsapás hatására színtelen porrá alakul. 60 15. példa 0,1 g G-szirodezmint feloldunk 1 ml tömény sósavat tartalmazó 100 ml metanolban és az oldatot szobahőmérsékleten, sötétben 3 napig állni hagyjuk. Ezután az oldószert ledesztüláljuk és a maradékot 65 preparatív vékonyréteg-kromatográfiával tisztítjuk. „G.F." szilikagél-lemezt alkalmazunk, 5% metanolt tartalmazó kloroformmal, mint oldószer-rendszerrel. 11