167530. lajstromszámú szabadalom • Eljárás xilosztaszin előállítására
13 167530 14 3 x 90 cm méretű kromatografáló oszlopon engedjük át. A xilosztaszint vizes ammóniaoldattal, grádiens-eluációval (0n-M,7n) deszorbeáljuk. A xilosztaszint tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és csökkentett nyomáson desztilláljuk az oldatot. Száraz desztillációs maradékként 2,4 g fehér színű port kapunk, amely tiszta xilosztaszin. Az előállított szabad bázis vizes oldatának pH-ját 2n kénsavoldattal 4 és 5 közé állítjuk be, és az oldatot aktív szénből készült kromatografáló oszlopon engedjük át. A hatóanyagot 0,03 n vizes kénsavoldattal eluáljuk. Az aktív frakciókat összegyűjtjük, pH-ját Amberlite IR-45 (OH"-ciklus) anioncserélő gyantával kezelve 6,0-ra álb'tjuk be és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékként kapott sűrítményhez acetont adunk, amikor csapadék válik ki az oldatból. A csapadékot szűréssel elkülönítjük és csökkentett nyomáson szárítjuk, amikor fehér színű porként xilosztaszin-szulfátot kapunk. 2. példa Glicerin-bouillon-agaron tenyésztett Bacillus sp. V-7 törzzsel a következő összetételű táptalajt oltunk: Polipepton 3% Húskivonat 1% Nátriumklorid 0,5% A táptalaj pH-ját 7,2-re állítjuk be. Az oltást követően 40 órán át 28 C° hőmérsékleten rázatjuk a tenyészetet. Ezzel az inokulummal 50 literes készülékben sterilezett 30 liter térfogatú főfermentációs táptalajt oltunk. Ennek összetétele a következő: Glükóz 1% Polipepton 0,7% Húskivonat 0,5% Nátriumklorid 0,3% A táptalaj pH-ját 8,0-ra állítjuk be. Az oltáshoz 3 liter inokulumot használunk. Az oltást követően 28 C° hőmérsékleten 66 órán át folytatjuk a tenyésztést, miközben percenként 30 liter levegőt buborékoltatunk át a táptalajon, keverés: 200 fordulat/perc. A tenyészléhez ezután 150 ml 4%-os vizes kicsapószer-oldatot (Primafloc C-7, Rohm and Haas Co.) és 300 g Hyflo Supercel (Johns-Manville Products Co.) szűrési segédanyagot adunk. Telített, vizes oxálsav oldattal 1 és 2 közé állítjuk be a szuszpenzió pH-ját és szűrjük. A 24 liter térfogatú szűrlet pH-ját 8,5 és 9,5 közötti értékre állítjuk be, majd 1% aktív szenet adunk hozzá és 30 percen át keverjük. Ezután a hatóanyag közel 100%-a a szenén adszorbeálódik. A szenet elkülönítjük, vízzel mossuk és 3 liter 30% vizet tartalmazó metanolban szuszpendáljuk. A szuszpenzió pH-ját 4n vizes hidrogénklorid oldattal 5 2-re állítjuk be, amikor a hatóanyag leoldódik az adszorbensről. A szénport szűréssel elkülönítjük. A szűrletet a metanol eltávolítására csökkentett nyomáson desztilláljuk, a desztillációs maradékként 10 kapott sűrítmény pH-ját Amberlite IR-45 (OH' -ciklus) anioncserélő gyantával semleges értékre állítjuk be. A 7-es pH-jú oldatot Amberlite CG-50 (NH4 + -ciklus) kationcserélő gyantából készült oszlopon kromatografáljuk, amikor a ható-15 anyag a gyantához kötődik. Az eluálást vizes ammóniaoldattal, grádiens-eluációval (0% -» 10%) végezzük. A hatóanyagot tartalmazó frakciókat összegyűjt-20 jük és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékként kapott sűrítményhez acetont adunk. A kivált csapadékot elkülönítve 5,7 g, 30% xilosztaszint tartalmazó nyersterméket kapunk. 25 9,6 g súlyú, a fenti eljárással előállított nyersterméket az 1. példában megadott eljárást megismételve tisztítunk, amikor fehér színű porként 2,5 g xilosztaszint kapunk. 3. példa Glükóz-bouillon-agaron tenyésztett Bacillus sp. 35 Y-399 törzzsel a következő összetételű táptalajt oltunk: Polipepton 3% 40 Húskivonat 1% Nátriumklorid 0,5% A táptalaj pH-ját 7,2-re állítjuk be. Az oltást követően 28 C° hőmérsékleten 40 órán 45 át rázatjuk a tenyészetet. Ezzel az inokulummal 50 literes férmen torban 30 liter, a következő összetételű főfermentációs táptalajt oltunk: Dextrin 2% 50 Oldható keményítő 0,5% Polipepton 1,2% Húskivonat 0,7% MgS04 0,5% 55 A táptalaj pH-ját 7,5-re állítjuk be. Az oltáshoz 3 liter inokulumot használunk. Az oltást követően 28 C° hőmérsékleten, a táptalajon percenként 30 liter levegőt átbuborékoltatva, per-60 cenkénti 200 fordulattal forgó keverővel keverve tenyésztünk. A tenyésztés befejeződése után az 1. példában megadott eljárást megismételve 22,1 g, 70% xilosz-65 taszin-tartalmú por alakú nyersterméket kapunk. 7
