167515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxi-L-prolin és N-acetil-hidroxi-L-prolin-előállítására hidrolizált zselatinból
5 167515 6 10 15 20 3. példa N-acetil-L-hidroxi-prolin benzoilezése (A) 8 liter 2. példa szerint készített, acetilezett oldatot 16 liter vízzel hígítunk és az egészet 0 C°-ra hűtjük. Ezután 1,05 liter benzoilkloridot és 8 liter 2n nátriumhidroxid-oldatot adunk 30 perc leforgása alatt keverés közben a reakcióelegyhez, miközben a hőmérsékletet 0-3 C°-on tartjuk. Az adagolás befejezése után a reakcióelegyet keverés közben legalább két óra hosszáig 0—3 C°-on és semleges pH-n tartjuk. A reakcióelegyet ezután 5 liter 34%-os sósav adagolása útján keverés közben l-es pH-ra savanyítjuk, a hőmérsékletet pedig 0 C°-on tartjuk. Az elegyet kloroformmal extraháljuk, vízzel mossuk és csökkentett nyomáson betöményítjük, a maradékot éterrel (4-5 liter) elpépesítjük, 30 percig keverjük és 40 percig 4 C°-on állni hagyjuk. Az elegyet szűrjük és a csapadékot, amely N-acetil-O-benzoil-hidroxi-L-prolin, vákuumban szárítjuk. Kitermelés 160 gram. Op. 175 C°, [a]^°=-40,4° (c = 1,6973%, etanol). Kloroform-etiléter-elegyből való átkristályosítás után a termék 183—184C°-on olvad. (B) 2,8 liter, 2. példa szerint előállított acetilezett vegyületet tartalmazó oldatot 280 ml acetonban oldunk, az oldathoz keverés közbén 8 ml benzoilkloridot és 80 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatot adunk olyan ütemben, hogy a hőmérséklet ne emelkedjék 0 C° fölé. A reakcióelegyet legalább 30 percig keverjük, az oldat pH-ját ellenőrizzük és 2 n nátriumhidroxi-oldat vagy ecetsav hozzáadása útján semleges értéken tartjuk. A fent leírt reakciókörülmények között 80 ml benzoilkloridot és 800 ml 2 n nátriumhidroxid-oldatot adagolunk. Az elegyet keverés közben 90 percig 0 C°-on tartjuk, majd az acetont csökkentett nyomáson eltávolítjuk. A maradékot 250 ml vízzel hígítjuk és a hígított elegyet 600 ml tömény sósavval megsavanyítjuk, majd kloroformmal extraháljuk. A szerves fázist vízzel mossuk, csökkentett nyomáson betöményítjük és a maradékot 1 liter etiléterből kikristályosítjuk. Ily módon 12 g N-acetil-O-benzoilhidroxi-L-prolint kapunk. Op. 170-176 C°, [a]l° = -35° (c= 1,6973, etanol). 50 4. példa N-acetil-hidroxi-L-prolin 150g N-acetil-O-benzoil-hidroxi-L-prolin és 55 600 ml 2 n NaOH elegyét keverés közben 5 óra hosszat szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután 750 ml IR 120 (H*) Amberlite gyantát (Rohm and Haas gyártmány) adunk az elegyhez és az egészet legalább 30 percig keverjük. Eközben nagy mennyiségű csapadék keletkezik, amely benzoesav. Ezt szűréssel elkülönítjük és a maradékot vízzel többször mossuk oly módon, hogy a szűrt termék végső térfogata 4 liter legyen. Ezt az oldatot IR 120 (H*) Amberlite gyantával töltött oszlopon 65 keresztül perkoláljuk. Az elfolyó oldatot 40 C°-on csökkentett nyomáson 450 ml-re betöményítjük és 200 ml kloroformmal extraháljuk. A vizes oldatot 6g csontszénnel színtelenítjük, szűrjük és szárítjuk. A maradékot 270 ml acetonnal elpépesítjük és 30 percig kristályosodni hagyjuk. A kristályokat szűréssel elkülönítjük és vákuumban szárítjuk. Ily módon 84,5 g N-acetil-hjdroxi-L-prolin-monohidrátot kapunk. Op. 74-76 C°. Ezt a terméket 55 C°-on 10 óra hosszat vákuumban tartjuk, eközben elveszti kristályvizét és így 76 g vízmentes N-acetil-hidroxi-L-prolint állítunk elő. A kristályvízből további 6,5 gramm vízmentes terméket lehet kapni, így a teljes hozam 82,5 gramm lesz. Op. 126-128 C°, [aß« = 119,5 (c = 3,75,víz). 5. példa Hidroxi-L-prolin 50 gramm N-acetil-O-benzoil-hidroxi-L-prolin, 300 ml 34%-os sósav és 200 ml víz elegyét 18 óra 25 hosszat visszafolyatás közben melegítjük. Ezután a reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük és kétszer extraháljuk 100 ml kloroformmal. A vizes oldatot csökkentett nyomáson betöményítjük, a maradékhoz vizet adunk és utána ismét betöményítjük 30 csökkentett nyomáson. Ezt a műveletet többször megismételjük avégett, hogy a sósavfelesleget eltávolítsuk. A végső maradékot 500 ml vízben oldjuk és az oldatot 165 ml IRA 68 Amberlite gyantával (Rohm and Haas gyártmány) (szabad 35 bázis) kezeljük. Ezután a reakcióelegyet szűrjük, a gyantát vízzel mossuk, a vizes oldatokat összegyűjtjük és aktívszénnel színtelenítjük. A szenet szűréssel elválasztjuk és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékhoz 250 ml metanolt adunk, ekkor 40 hidroxi-L-prolin kristályosodik ki, e kristályos terméket szűrés útján elkülönítjük és szárítjuk. Kitermelés 22,5 g. [a]h2 =-75° (c = 2,37,víz). Elemzés a C5H9NO3 képlet alapján: 45 számított: C 45,79%, N 10,68%, H 6,91%, talált: C 45,58%, N 10,44%. H 6,87%, 60 A példákban különböző eljárási módszereket adtunk meg, a találmány oltalmi köre azonban nem korlátozódik kizárólag a példákban leírt módszerekre, azokban különböző változtatások lehetnek. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás hidroxi-L-prolin és e vegyület N-acetil-származékának előállítására arginint is tartalmazó hidrolizált állati eredetű zselatinoldatból, azzal jellemezve, hogy a hidrolizált zselatinoldatot ecetsavanhidriddel és egy alkálifémhidroxiddal semleges pH-értéken 0—5 C hőmérsékleten keverve acetilezzük, az acetilezett oldatot kívánt esetben hígít-3
