167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
21 167369 22 részsorozat), és 16 óra hosszat 25°-on keverjük. Ezután leszűrjük, a szüredéket bepároljuk, és a maradékot forró metanollal mossuk. Bzl-MCPSer-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe-t kapunk. Olvadáspontja 244°, [aß0 =-22° (c=l, 5 dimetilformamidban). Ezt a terméket 60°-on 100 ml dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 10 ml hidrazinhidrátot, és 2 óra hosszat 60°-on állni hagyjuk. A keletkezett nonapeptidhidrazid kikristályosodik. Dietiléterrel, vízzel, majd méta- 10 nollal mossuk, és nagyvákuumban foszforpentoxidon megszárítjuk. A nonapeptidhidrazidot kapjuk. Olvadáspontja 265°, [aß 0 =-35° (c=l, 3 : 1 arányú dimetilformamíd-víz elegyben). 15 Az így kapott terméket 5000 ml száraz cseppfolyós ammóniában oldjuk, keverés és az ammónia forrása közben fémnátriumot adunk hozzá sötétkék színeződésig. Ammóniumkloriddal elszíntelenítjük, majd levegőáramot vezetünk az oldaton át negatív 20 nitroprusszid-reakcióig. Szárazra pároljuk, és a maradékot vízzel és acetonnal mossuk. Szárítás után MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-NHNH2 -t kapunk. Olvadáspontja 278°, [a ß 0 =_19 o (c=l, 3:1 arányú dimetilformamidvíz elegyben). 1. példa BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg- 35 -Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -2CH 3 COOH- 3H 2 0 1,0 g nonapeptidet (EF részsorozat) 10 ml dimetü- 40 formamidban oldunk, az oldathoz hozzáadunk 1,5 g N-hidroxiszukcinimidet és 0,52 g diciklohexilkarbodiimidet, 6 óra hosszat 25°-on keverjük, leszűrjük, és a szüredéket szárazra pároljuk. A maradékot etilacetáttal és dietilészterrel mossuk, és megszárítjuk. A kapott 45 BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OSu-t (olvadáspontja 242°) 10 ml dimetilformamidban oldjuk. Az oldathoz hozzáadunk 3,1 g trikozapeptid-diacetátot (ABCD részsorozat) 50 és 1,2 g N-hidroxiszukcinimidet, és 16 óra hosszat 25°on keverjük. Ezután szárazra pároljuk, a maradékot dietiléterrel, kloroformmal és acetonnal mossuk, így a nyers, védett dotriakontapeptidet kapjuk, ezt 50 ml 70 : 30 : 5 arányú kloroform-meta- 5S nol-víz keverékben oldjuk, az oldatot a fenti keverékkel egyensúlyba hozott 5 cm átmérőjű és 100 cm magas kovasavgéloszlbpra visszük. Az eluálást növekvő metanoltartalmú oldószerrel végezzük. A tiszta pepiidet tartalmazó egyesített frak- 6° ciókat bepároljuk, a maradékot dietiléterrel mossuk, és káliumhidroxidon nagyvákuumban megszárítjuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk. Olvadáspontja 230° (bomlik), [aß 0 = -45° (c =1, 50%-os ecetsavban). Kitermelés 70%. 65 2. példa H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2-hexaacetát-dekahidrát 3,3 g védett dotriakontapeptid-diacetát-trihidrátot (1. példa) nitrogénatmoszférában feloldunk 100 ml trifluorecetsavban, 15 percig 20°-on állni hagyjuk, majd szárazra pároljuk. A maradékot 300 ml 0,2 n ecetsavban oldjuk, 20 ml acetátfázisú Amberlite-IRA-410-zel kezeljük, liofilizáljuk, a maradékot dietiléterrel mossuk, és káljumhidroxidon nagyvákuumban megszárítjuk. A cím szerinti vegyületet kapjuk. Olvadáspontja 220° (bomlik), [a]f)° =-46° (c=l, 50%-os ecetsavban). Kitermelés 90%. Az 1., illetve 2. példában leírttal azonos módon állíthatók elő még a következő vegyületek: 3. példa Piv-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys(BOC)-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 -diacetát-trihidrát Kiindulási termék: EF1 és ABCD részsorozatok. Az 1. példa szerinti eljárás. Olvadáspontja 220° (bomlik), [aß° =_4 5 ° (c =1, 50%-os ecetsavban). Kitermelés 70%. 4. példa Piv-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2--hexaacetátoktahidrát Kiindulási termék: a 3. példa szerinti dotriakontapeptid. A 2. példa szerinti eljárás. Olvadáspontja 216° (bomlik), [aß 0 =-49° (c = 1,50%-os ecetsavban). Kitermelés 80%. 5. példa EOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys(BOQ-Leu-Ser-Gln-Glu(OTB)-Leu-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2--diacetát-trihidrát Kiindulási termék: EF2 és ABCD részsorozatok. Az 1. példa szerinti eljárás. Olvadáspontja 230° (bomlik), [aß 0 = -45° (c=l, 50%-os ecetsavban). Kitermelés 70%. 11
