167286. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidromicin-B-előállítására

167286 kezeljük pH = 2—4 értéken, majd leszűrjük és a savas szűrletből ammóniumhidroxidos semlegesítés után a higromicin-B megkötését nem nátrium-, hanem ammónium-formájú karboxil-típusú kationcserélő gyantán végezzük. Az oxálsav alkalmazásával a zavaró kalciumionok eltávolításán túlmenően a fermentlé szűrhetőségét is sikerült lényegesen megjavítani. Az ammóniumciklusban alkalmazott gyanta felhasználása pedig szükségtelenné teszi a termék anorganikum tartalmának eltávolítását szolgáló bonyolult szenes-adszorbciós és lecsapásos lépéseket. A továbbiakban azt találtuk, hogy a higromicin-B-nek a gyantáról való leoldását sokkal előnyösebb a nagy térfogatú híg sósav ill. 1 n savak ill. bázisok helyett híg vizes ammóniumhidroxid oldatokkal (0,1—0,8 n) célszerűen 0,3 n végezni, miután a gyantáról a szennyezéseket igen híg vizes ammóniumhidroxid oldatokkal (0,02—0,08 n) történő mosással előzetesen eltávolítottuk. Az így kapott viszonylag kis térfogatú ammóniumhidroxidos eluátumokból közvetlenül bepárlással meglepő és igen egyszerű módon, jó hatásfokkal preparálható a higromicin-B. A fentiek értelmében a találmány szerint úgy állítunk elő állatgyógyászati és állattakarmányozási célokra alkalmas higromicin-B-t karboxil-típusú kationcserélő gyanta felhasználásával, hogy az oxálsav segítségével kalciummentesített és leszűrt vizes oldatot, előnyösen leszűrt erjesztéses oldatot ammónium-formában levő karboxil-típusú kationcserélő gyantával hozzuk érintkezésbe 4,0—10,0, célszerűen 6,0—8,0 pH értéken, majd a megkötött higromicin-B-t a gyantáról vizes ammóniumbázis, célszerűen vizes ammóniumhidroxid-oldat segítségével oldjuk le, és adott esetben az így kapott oldatból a higromicin-B-t a víz és az ammóniumbázis eltávolítása, célszerűen vákuumbepárlás útján elkülönítjük. A találmány szerinti eljárás egy előnyös foganatosítási módja szerint a higromicin-B-nek a gyantáról történő leoldása előtt a gyantaágyat először viszonylag híg, 0,01—0,08 n ammóniumhidroxid oldattal mossuk át. Ezen a módon a higromicin-B-t kísérő, az erjesztéses oldatban jelenlevő és a gyantán szintén megkötődő egyéb bázisos anyagcseretermékeket, pigmenteket és egyéb szennyezéseket (kísérő antibiotikumok) szelektív leoldással eltávolítjuk. A szennyezések eltávolítása után a higromicin-B-t a gyantáról 0,1—1,0 n ammóniumhidroxidoldattal tiszta állapotban oldhatjuk le. Az így kapott tiszta vizes eluátum higromicin-B tartalma a 6—15%-ot is eléri. A higromicin-B ebből az oldatból igen egyszerű módon, például a víznek és ammóniának csökkentett nyomáson való elpárologtatásával vagy a nagyüzemileg kiválóan alkalmazható porlasztva szárítással nyerhető ki. Az így kapott termék halvány sárgásfehér színű amorf por. Higromicin-B tartalma 90—95 %. Hamutartalma 1—3 %. Az eljárás hozama a kiindulási erjesztéses oldatban levő higromicin-B-re vonatkoztatva 70—75%. A találmány szerinti eljárással kapott higromicin-B minden szempontból megfelel az állatgyógyászati, illetve állattápszerként történő alkalmazás követelményeinek; nem tartalmazza az erjesztéses oldatban jelenlevő szennyezéseket, sem a higromicin-B mellett képződő egyéb antibiotikumokat, pl. .5 a higromicin-A-t (az ultraibolya színképe alapján). Eljárásunk egyik nagy előnye, hogy az oxálsavas szűréssel a higromicin-B megkötését erősen zavaró (a gyanta kapacitását csökkentő) és a végtermék 10 minőségét is igen károsan befolyásoló kalciumionokat ezzel a lépéssel eltávolítjuk. Eljárásunk további igen nagy előnye, hogy a higromicin-B megkötését és leoldását az ioncserélő gyantáról ammóniumciklusban végezzük. Ezzel a módszerrel a higro-15 micin-B leoldása után kapott eluátumból a tiszta hatóanyagot igen egyszerű módon a vizes ammónia oldat bepárlásával jelentős tisztaságban, gyakorlatilag sómentesen megkaphatjuk, és így nincs szükség a bevezetőben ismertetett módszernél alkalma-20 zott bonyolult további tisztítási lépésekre. Nincs szükség a gyanta teljes telítésére sem, ugyanis ammóniumciklusban dolgozva az eluátum csak illékony ammóniumionokat tartalmaz, melyek a bepárlásnál maradéktalanul eltávolíthatók. A híg 25 (0,01—0,08 n) ammóniumhidroxidos eluálási lépés pedig a hatástalan szennyezések eltávolítását oldja meg igen egyszerű módon. A higromicin-B állattakarmánykónt történő fel-30 használásának egy előnyös megvalósítási módja az, ha a kb. 30% szárazanyag tartalomig bepárolt eluátumot a takarmánnyal alaposan és egyenletesen összekeverjük. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az 35 alábbi kiviteli példát adjuk meg: Példa: 1000 liter, a S. hygroscopicus (NRRL—2387)törzsnek a 3 018 220 sz. USA szabadalmi leírás 40 1. példája szerint előállított erjesztéses oldatához (2600 |itg/ml higromicin-B) állandó keverés közben annyi oxálsavat adunk, hogy az elegy pH-ja 3,5 legyen. Ehhez kb. 10—15 kg oxálsav szükséges. A savanyú fermentlevet megszűrjük, majd a micé-45 liumot 3X100 liter 50—60 C°-os 0,05%-os oxálsav oldattal átmossuk. A kapott oldat (1225 liter, 1980 /ig/ml) pH-ját koncentrált ammóniumhidroxiddal 7,0-ra állítjuk be. Az oldatot ezután 2 db sorbakapcsolt, egyenként 8—8 liter ammóniumförmájú 50 Wofatit CP—300 ioncserélő gyantát tartalmazó oszlopon (oszlopátmérő: 15 cm, rétegmagasság: 45 cm) folyatjuk át 50 liter/óra sebességgel. A megkötés végén az első oszlopon átfolyó oldat higromicin-B tartalma kb. 1800 fig/ml, a második gyantaágyon 55 átfolyó oldat pedig 20 /íg/ml-nél kevesebb higromicin-B-t tartalmaz. A gyantaágyakat ezután 50—50 liter deszt. vízzel kimossuk, majd az első gyantaágyat 30 liter 0,05 n ammóniumhidroxid oldattal mossuk át 4 liter/óra sebességgel. A kapott 60 30 liter, némely esetben feketésbarna színű oldat higromicin-B tartalma 500 jttg/ml. A higromicin-B-t ezután a gyantáról 60 liter 03, n ammóniumhidroxid oldattal oldjuk le 3 liter/óra sebességgel. A kapott 60 liter enyhén sárgás színű éles oldat higro-65 micin-B tartalma 33 000 jtig/ml. 2