167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
59 roljuk, kb. 100 ml-re, és éterrel teljesen kicsapjuk, mikor a kicsapódott olaj gyorsan megdermed. Az éteres oldatot leöntjük és a maradékot vákuumban rövid ideig szárítjuk, majd vízzel eldörzsöljük. A kivált dekapeptidszármazékot leszívatjuk, vízzel mossuk és szárítjuk. Tisztítás céljából 25 ml kloroformban oldjuk, a kevés oldhatatlan anyagot leszűrjük, a szűrletet kb. fele térfogatra pároljuk be és hexánnal kicsapjuk. így a tiszta dekapeptidszármazékot kapjuk, amely szilikagéles vékonyrétegkromatogramon Rf10o = 0,48 értéket ad. 13. Z-Asp(OtBu)-Phe-OMe 30,3 g Z-Asp(OtBu)-ONP és 18,3 g H-Phe-OMe-hidroklorid elegyét 150 ml dimetilformamidban oldjuk és a tiszta oldathoz 11,8 ml trietilamint csepegtetünk. A keletkezett szuszpenziót 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük, mialatt az sötétsárgára színeződik. Ezután vákuumban kb. 100 ml-re pároljuk be, és 1 liter etilacetát-kloroform (4:1) elegyben háromszor 5%-os citromsavoldattal, 19-szer kb. 2 n nátriumkarbonátoldattal és telített nátriumkloridoldattal a semleges reakcióig mossuk. A sárga olajos nyers terméket éteres közegben aktív szénnel kezeljük és 650 ml éter-hexán (1:1) elegy hozzáadása után hűtőszekrényben kristályosítjuk. Színtelen, 75,4—76,5° olvadáspontú tűk keletkeznek. Szilikagéles vékonyrétegkromatogramon az Rf-órtékek kloroform-metanol (95:5) elegyben = = 0,74, kloroform-aceton (75:25) rendszerben = = 0,65. 14. H-Asp(OtBu)-Phe-OMe-hidroklorid 48,6 g Z-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 700 ml metanolban 33,5 ml 3 n dioxános sósavoldat és 5 g 10%-os palládium-szén-katalizátor hozzáadásával rázókacsában, szobahőmérsékleten dekarbobenzoxilezünk. A hidrogénfelvétel megszűnése után a reakcióelegyet leszűrjük és bepároljuk. így 38,7 g fehér habot kapunk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint az Rf-érték kloroform-metanol (9:1) elegyben = 0,60; kloroform-aceton (1:1) rendszerben = 0,58; Rf102 E = = 0,42. A terméket minden további tisztítás nélkül felhasználjuk a következő kondenzációhoz. 15. Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 38,6 g keletkezett H-Asp(OtBu)-Phe-OMe-hidrokloridot és 42,0 g Z-Gln-ONP vegyületet 170 ml dimetilformamidban átlátszó, enyhén sárgás oldattá oldunk és keverés közben lassan 13,9 g trietilamint adunk hozzá. így egy narancssárga szuszpenzió keletkezik, amelyet 24 órán át 30—35° fürdőhőmérsékleten keverünk. Ezalatt az idő alatt további 40 ml dimetilformamidot és még 1,39 ml trimetilamint adunk a reakcióelegyhez. Feldolgozás céljából az anyagot 4 liter kloroformban oldjuk és egy 20 lépcsős ellenáramú megoszlató készülékben (fázistérfogat: alsó fázis 400 ml, felső fázis 200 ml edényenként egymás után 1 liter 5%-os citromsavoldattal, 400 ml telített nátriumkloridoldattal, 6 liter, kb. 2 n nátriumkarbonátoldattal és 2,8 liter telített nátriumkloridoldattal mossuk. Szárítás és bepárlás után a tripeptidszármazék hűtőszekrényben 1,8 liter etanolból lassan kikristályo-60 sodik. így kapjuk a Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe vegyületet, op.: 186—188°. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok során a következő Rf-értékeket kapjuk: 5 kloroform-metanol (9:1) rendszerben: Rf = 0,39; kloroform-aceton (1:1) rendszerben: Rf =0,24; Rf10 2E = 0,69; Rf89 = 0,46; Rf43A = 0,65; [OJD =—28°±1° (C = 1,3, dimetilformamidban). 10 16. H-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe-hidroklorid 7,55 g Z-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OCH3 vegyületet 400 ml metanolban oldunk és 2 g 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A katalizátort leszívatjuk, majd a szűrletet bepárolva 15 H-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe-hidroklorid keletkezik, színtelen hab alakban. Szilikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során a következő Rfértékeket kapjuk: kloroform-metanol rendszerben (9:1) Rf =0,13; 20 kloroform-aceton (25:75) rendszerben Rf=0,14; Rfio2B = 0,22. 17. Z-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe A 16. pont szerint előállított összes hidrokloridot 25 és 7,5 g Z-Thr(tBu)-OSU vegyületet szobahőmérsékleten 14 ml dimetilformamidban oldunk és jégfürdőn történő hűtés közben 1,72 ml trietilamint adunk hozzá. Ezután a barnás szuszpenziót 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Bepárlás és etil-30 acetátos extrakció után az elegyet (három-háromszor) 5%-os citromsavoldattal és kb. 2 n nátriumkarbonátoldattal, végül telített konyhasóoldattal semlegesre mossuk, nátriumszulfát felett szárítjuk és vákuumban 30—40°-on bepároljuk, majd a 35 nyers terméket etanolban aktív szénnel kezeljük és hűtőszekrényben 90 ml etanolból kikristályosítjuk. Op.: 155—161°. Szilikagélen vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatot végezve a következő Rf-értékek adódtak: 40 kloroform-metanol (9:1) elegyben Rf = 0,52; ciklohexán-aceton (3:7) rendszerben Rf =048;Rfsg = 0,48; Rf 121 A = 0,76; Rf 121 A = 0,76. [aJn = —4°±0,5° (c = 2,3, dimetilformamidban). 45 18. H-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 478 mg Z-Thr(OtBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe vegyületet 150 ml metanolban, 100 mg (10%-os) palládium-szén-katalizátorral semleges körülmények között hidrogénezünk. 395 mg színtelen, H-50 -Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe habot kapunk, amelyet miden további tisztítás nélkül felhasználunk a következő kondenzáció során. Szilikagéles vókonyrétegkromatográfiás vizsgálat során a következő Rf-értékeket kapjuk: 55 kloroform-metanol (1:1) rendszerben = 0,75, kloroform-metanol (9:1) rendszerben = 0,17; acetonban = 0,18; Rfio2B = 0,23; Rf8» = 0,12. 60 19. Z-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-OMe 687 mg Z-Tyr(tBu)-OH-diciklohexilammónium-sót kloroformos oldatként vizes citromsavoldattal kirázunk és az így kapott, tiszta olaj formájú szabad 65 savat 6,5 ml tetrahidrofuránnal és 0,139 ml N-metil-30
