167097. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens trigliceridek meghatározására
167097 8 0,2 mg diaforázt (sertésszívből) 1 mg NAD-t 100 mg ATP-t 1 mg tetrazólium-sót, előnyösen 2-benztiazolil(2)-3-fenil-5-(4-N-trimetil -ammóniumfenil)-tetrazólium-di-kloridot tartalmaz. Az extinkciót (Et ) 546nm-nél leolvassuk és a reakciót megindítjuk 0,1 ml oldat hozzáadásával, mely 0,5 mg glicerokináz és 1 mg a-glicerofoszfát-dehidrogenázt tartalmaz. 25 perc után (20-25 C°) mérjük a végső extinkciót, E2 -t és számítjuk a koncentrációt a következő képlet alapján. AE • V • MW , koncentráció Oug/ml)= * higitasi faktor, E • d • v ahol V= a vizsgálandó térfogat v= a minta térfogata MW= a molekulasúly E= 27,4 (cm2 /mól) d= a rétegvastagság (cm) hígítási faktor= 5 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás trigliceridek meghatározására lipázzal enzimatikusan végzett elszappanosítással és a felszabaduló glicerin önmagában ismert módon történő mérésével, azzal jellemezve, hogy az elszappanosítást karboxilészteráz, alkilgyökében 10-15 szénatomot tartalmazó alkáli- vagy alkáliföldfém-alkilszulfát, és adott esetben szérumalbumin jelenlétében végezzük el. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eljárást 6-9 pH-értéknél hajtjuk végre. 10 15 20 25 30 35 40 3. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 0,001-0,1% (súly per térfogat) alkilszulfátot használunk. 4. A 2. vagy 3. igénypont bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 0,1-2,0 mg/ml szérumalbumint alkalmazunk. 5. Az 1-4. igénypont bármelyike szerinti eljárás végrehajtására szolgáló reagens — amely elszappanosító anyagból, pufferből, glicerin kimutatásra szolgáló rendszerből, és utóbbi előnyösen redukált formájú nikotinamid-adenin-dinukleotidból, adenozintrifoszfátból, foszboenolpiruvátból, laktátdehidrogenázból, piruvátkinázból, glicerinkinázból, magnézium-ionokká és pufferből áll, — azzal jellemezve, hogy lipázt, karboxilészterázt, 10-15 szénatomszámú alkáli- vagy alkáliföldfém-alkilszulfátot és adott esetben szérumalbumint tartalmaz. 6. Az 5. igénypont szerinti reagens, azzal jellemezve, hogy 0,1-10,0 mg/ml lipázból (Rhizopus arrhizusból) 0,5-20,0 mg/ml karboxilészterázból 0,01-0,2 mg/ml nátrium-dodecilszulfátból 1-20 mM redukált nikotinamid-adenin-dinukleotidbi 10—100 mM adenozintrifoszfátból 2-20 mM foszfoenolpiruvátból 0,5-5 mg/ml laktátdehidrogenázból 0,2-5 mg foszfoenolpimvátkinázból 0,05-10 mg glicerinkinázból 0,1-2,0 mg/ml szérumalbuminból 3-30 mM magnézium-ionból és 0,03-0,3 M pufferoldatból, pH 6-9, áll. 7. Az 5. vagy 6. igénypont bármelyike szerinti reagens, azzal jellemezve, hogy pufferként pH 7—8,5 értékű 0,1 M trietanolaminpuffert használunk. 1 rajz A kiadásért felel: a Közgazdásági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 766068 - Zrínyi Nyomda
