166817. lajstromszámú szabadalom • G-és V-pennicillin előállítására
3 sebességeket képes elviselni represszió nélkül. Ezért e törzzsel lehetséges olyan fermentációkat készíteni, melyeknél a szénforrás fogyasztási sebesség 65—70 mg%/óra és ugyanakkor a penicillin bioszintézis sebessége eléri a 125—140 E/ml/óra penicillin termelési sebességet is 90—110 órás fermentációkban. Eljárásunk tehát G- és V-penicillin előállítására alkalmas azzal jellemezve, hogy a Penicillium chrysogenum U-337/B jelzésű 00111 szám alatt deponált UV mutáns törzset vagy annak azonos tulajdonságokkal rendelkező utódait a 160.060 sz. magyar szabadalmi leírásban lefektetett elvek szerint, de a törzs különlegesen magas repressziós szintje következtében 60—70 mg%/óra szénforrás adagolási sebesség tartásával pH 6,6—7,0 értéken fermentáljuk, majd az így előállított fermentlevekből a penicillint ismert módszerekkel kinyerjük. A Penicillium chrysogenum U-337/B jelzésű 00111MNG szám alatt deponált törzset az alábbiakban jellemezzük: A Czapek agáron növesztett telepek 25 °C-on 10—12 nap alatt 40—60 mm átmérőjűvé fejlődnek. 30 °C-on 25—50 mm átmérőjű telepeket kapunk 10—12 nap alatt. 37 °C-on a növekedés gyakran elmarad. A telepek leírása a következő: a felület radiálisán barázdált, bársonyos vagy pihés, a telepek széleit 0,8—3,0 mm szélességben fehér szegély veszi körül. A telepek középpontja sárgás vagy krémszínű, a telepek konidiumos területei sárgászöld vagy kékes-zöld ámyalatúak. A telepek nedvkiválasztása mindig bőséges, a kiválasztott nedv sárgás árnyalatú. A hátlap világos sárga; ez a szín az agárba a telep környezetébe diffundál. A conidiophorák a szubsztrátumból kiemelkednek, a condiumok átmérője 4 mikron körül van. A törzs jellemző vonása, hogy sterilizált hántolt rizsen különlegesen gyorsan növekedik, 3—4 nap alatt 25 °C-on a rizsszemek felületét a conidiumok teljesen beborítják. A törzs biokémiai jellemző vonása, hogy rázott kultúrában igen magas termelőképességet mutat még abban az esetben is, ha olyan tenyésztési médiumot alkalmazunk, amelyen a laktóz fogyasztási sebessége 120 órás fermentációban eléri a 75 mg%/ óra értéket, mely értéknél az eddig ismert törzsek már erősen reprimált termelést mutatnak. A törzs jellemző vonása, hogy ipari fermentációkban 60— 70 mg%/óra szacharózadagolási sebesség mellett kivételesen rövid fermentációkban (90 óra) kivételesen magas termelési szintet (12.160 E/ml) képes elérni. Az ismert mutánsok termelési sebessége ennél lényegesen alacsonyabb, max. 8040 E/ml 96 óra alatt. (Chem. Abstr. 69, 42.790 n.) A törzs jellemző sajátossága, hogy prekurzortűrő képessége igen magas: bioszintetikus és anyagcsere folyamatainak észlelhető változása nélkül 1 % fenoxiecetsavat vagy 0,1% fenilecetsavat képes elviselni a tenyésztő médiumban. A törzs előállítása úgy történt, hogy a Penicillium chrysogenum U-137 jelzésű törzsünk spóraszuszpenzióját UV besugárzásnak vetettük alá. 60% letalitás elérésekor a besugárzást megszüntettük, és a 4 túlélőkből sterilizált hántolt rizsszemeken spórás tenyészetet állítottunk elő. A spórás rizsszemekről lemosott spóraszuszpenziót újból a korábban leírt kezelésnek vetettük alá. Ezt a folyamatot 17 eset-5 ben ismételtük. E művelet közben megfigyeltük, hogy a túlélők spórázó készsége, valamint fenoxiecetsav és fenilecetsav tűrő képessége fokozatosan növekedett. A folyamat a 17. lépés után a túlélőkből készített rizstenyészetből monokultúrákat ké-10 szítettünk és a monokultúrák között igen nagy számban találtunk olyan törzseket, melyek tulajdonságai a jellemzésben leírt irányba fejlődtek. Eljárásunk kivitelezését a 7—12. példákon szemléltetjük. 15 Példák: 1. A 160.060 sz. magyar szabadalmi leírásban le-20 írt elveknek megfelelően 22 m3 hasznos térfogatú üzemi fermentorban 2,73 kW/m3 energiafelvételű keverőt alkalmazva V-penicillin fermentációt készítettünk. A fermentáció oltóanyaga Penicillium chrysogenum U-137 jelzésű törzs volt. 25 A fermentáció során 50 mg%/óra szacharózadagolási sebességet alkalmaztunk. A fermentációt 105 órán át folytattuk, amikor a fermentlé V-penicillin tartalma elérte a 9100 E/ml értéket. A fermentációk penicillintartalmának meg-30 határozása jodometriás mérési módszerrel történt a BRITISH PHARMACOPOEIA London, 1968. előírása szerint. 2. A 160.060 sz. magyar szabadalmi leírásban leírt elveknek megfelelően 22 m3 hasznos térfogatú 35 üzemi fermentorban 2,73 kW/m3 energiafelvételű keverőt alkalmazva V-penicillin fermentációt készítettünk. A fermentáció oltóanyaga Penicillium chrysogenum U-137 jelzésű törzs volt. A fermentáció során 60 mg%/óra szacharózadagolási sebes-40 séget alkalmaztunk. A fermentációt 105 órán át folytattuk, amikor a fermentlé V-penicillin tartalma elérte a 7980 E/ml értéket. 3. A 160.060 sz. magyar szabadalmi leírásban le-45 írt elveknek megfelelően 22 m3 hasznos térfogatú üzemi fermentorban 2,73 kW/m3 energiafelvételű keverőt alkalmazva V-penicillin fermentációt készítettünk. A fermentáció oltóanyaga Penicillium chrysogenum U-137 jelzésű törzs volt. 50 A fermentáció során 70 mg%/óra szacharózadagolási sebességet alkalmaztunk. A fermentációt 105 órán át folytattuk, amikor a fermentlé V-penicillin tartalma elérte a 6405 E/ml értéket. 55 4. A 160.060 sz. magyar szabadalmi leírásban leírt elveknek megfelelően 22 m3 hasznos térfogatú üzemi fermentorban 2,73 kW/m3 energiafelvételű keverőt alkalmazva G-penicillin fermentációt készítettünk. A fermentáció oltóanyaga Penicillium 60 chrysogenum U-137 jelzésű törzs volt. A fermentáció során 50 mg%/óra szacharózadagolási sebességet alkalmaztunk. A fermentációt 105 órán át folytattuk, amikor a fermentlé G-penicillin tartalma elérte a 9570 E/ml 65 értéket. 2
