166799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás BM123alfa,béta és gamma-antibiotikumok előállítására

166799 17 18 1 g BM123y-t 20 ml abszolút metanollal 15 percig keverünk. A szuszpenziót leszűrve 305 mg szilárd terméket kapunk. A szűrlethez 60 ml étert adunk, amikor fehér szuszpenzió keletkezik. A szuszpenziót leszűrve fehér szilárd anyagot és csaknem fehér 5 szűrletet kapunk. A szilárd anyagot éterrel mossuk, levegővel szárítjuk; 602 g BM123y-t kapunk. A hatóanyagot vákuumban Abderhalden szárítóberendezéssel forrásban levő etanol fölött 16 óra hosszat szárítjuk, majd a kapott anyagot mikroanaütikai io és spektrofotometriai vizsgálatnak vetjük alá. A BM123y nem rendelkezik határozott olvadásponttal. A bomlás fokozatosan 200 °C körül következik be. A vizsgálat eredménve: C: 46,13%; H: 6,65%; N: 17,0%; O: 24,96%; hamu: 0,90%. 15 A vegyület 90%-os metanollal készült oldata 286 nm-nél mutat abszorpciós maximumot. Ei°om = 200. Specifikus forgatóképesség: [a]|5 =

+

53

;

8 (C =

1,004; vízben). A BM123y az infravörös tartományban az alábbi 20 hullámhosszaknál mutat maximumot: 765, 870, 980, 1045,1112,1175,1230,1340,1400,1465,1510,1570, 1610, 1660, 2910 és 3333 cm-1

. Az infravörös spektrumot Kbr tablettában vesszük fel. Az infravörös spektrumot a 3. ábra mutatja be. 25 670 mg BM123ß-t 12 ml metanollal elegyítünk, majd 15 perc után leszűrjük. A szűrlethez 36 ml étert adunk, a kapott fehér csapadékot leszűrjük, éterrel mossuk, levegővel szárítjuk. 466 mg BM123/J-t kapunk, amit ezt követően vákuumban 30 forrásban levő etanol fölött 4 óra hosszat szárítunk. Ezt követően mikroanalízist végzünk. A BM123/J nem rendelkezik határozott olvadásponttal. 200 °C körül fokozatosan bomlik. Az analízis eredménye C: 47,53%; H: 7,39%; N: 16,54%; 35 hamu: 1,04%. A BM123y

8-t 98%-os metanolban oldjuk. Az ultraibolya abszorpció vizsgálata során 286 nm-nél mutatkozik maximum. EJo°o

m

= 200. A maximum helyzete a pH-val nem változik. Specifikus forgatóképesség: [a]ff = +53,2 (C = 1,250; vízben). A BM123/3 infravörös abszorpcióját kálium-bromid tablettában vizsgáltuk. Abszorpciós maximum mutatkozik az alábbi hullámhosszokon: 826, 870, 922, 980, 1035, 1105, 1170, 1220, 1340, 1390, 1510, 1560, 1600, 1670, 3080, 3350 cm"1. A BM123« infravörös spektrumát a 2. ábra mutatja be. vizes-metanolos oldatát Whatman l-es papírcsíkokra visszük fel. A fölcseppentett papírcsíkokat az oldószer alsó és felső fázisának jelenlétében 1-2 óra hosszat állni hagyjuk. 90% fenol-m-krezol-ecetsavpiridin-víz 100 : 25 : 4 : 4 : 75 arányú elegyének alsó fázisát használjuk futtatószerként. A papírcsíkokat egy éjszakán át fejlesztjük ki, ezt követően szárítjuk, éterrel mossuk (a maradék fenol eltávolítására), majd K. pneumoniae-val leoltott agarlemezeken bioautográfiás vizsgálatot végzünk. A kapott Rrértékeket a 8. táblázat foglalja össze. 40 45 6. példa A hatóanyagok vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálata Az antibakteriális anyagokat papírkromatográfiásan vizsgálhatjuk. Ebből a célból a hatóanyag 50 VIII. táblázat Vegyület BM123oc BM123/3 BM123y Rf

-értékek 0,88 0,62, 0,71 0,20, 0,47 Az oc és a ß termék két hatóanyag elegyének bizonyult. A ß termék nagyobb részét a 0,62 Rf-fel rendelkező BM123(

8

1

teszi ki. Kisebb részben 0,71 R,f

-fel rendelkező BM123ß

2-t tartalmaz. A BM123a polárosabb komponensét BM123oc1-nek nevezzük, ennek Rf

-értéke 0,20. A kevésbé poláros komponenst BM123a2

-nek nevezzük,

R£

-értéke 0,47. A BM123a-t vékonyréteg-kromatográfia alkalmazásával két komponensre választhatjuk szét. A szétválasztáshoz Polygram Cel UV254 cellulózt (Brinkmann Instrument Ltd., Westbury, New York) alkalmazunk. A vékonyréteg-lemezeket 1% trinátriumcitrát vizes oldatával fejlesztjük 'ki. A hatóanyag elhelyezkedését a fentiekben leírt agarlemezeken végzett bioautográfiával állapítjuk meg. A lemezeken két sávot lehetett megkülönböztetni. BM123ÍZJ Rt: 0,90-es értékkel, a BMI23«

2

R

f

: 0,65 értékkel jelenik meg. Szabadalmi igénypont Eljárás az antibakteriális hatású BM123ac, a BM123/S és a BM123y jelzésű termékek keverékének előállítására, és kívánt esetben szétválasztására, azzal jellemezve, hogy az 5646 NRRL Norcardia sp. mikroorganizmust asszimilálható szénhidrát- és nitrogénforrást, továbbá szervetlen sót tartalmazó vizes táptalajban, süllyesztett, aerob körülmények között tenyésztjük, majd a kapott terméket elkülönítjük, és lehetséges és kívánt esetben a komponenseket szétválasztjuk. 3 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.0077 — Kossuth Nygmda, Budapest. F.v.: Monori István vezérigazgató 9