166799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás BM123alfa,béta és gamma-antibiotikumok előállítására

166799 13 14 Fertőzött, kezeletlen kontroll állatok 68/70 egér pusztult el a fertőzést követő első napon Klebsiella pneumoniae AD 512 4/5 128 0/5 64 32 0/5 7/10 16 10/10 8 8/10 4 0/10 5/5 2 8/10 1 4/10 0,5 0/10 Fertőzött, kezeletlen kontroll állatok 20/20 egér pusztult el a fertőzést követő 2 napon belül Fertőzött, kezeletlen kontroll állatok 10 15 20 Egyszeri Elő egér/összes vizs igálati egér szubkután dózis mg/kg 7 nappal a fertőzést követően szubkután dózis mg/kg BM123« BM123/

3 BM123y 25 Escherichia coli 311 512 5/5 128 5/5 30 32 1/5 8 1 9/10 4 5/10 10/10 2 3/10 9/10 1 1/10 5/10 35 0,5 0/5 4/10 0,25 3/10 0,12 1/5 18/20 egér pusztult el a fertőzést .. követő 3 napon belül A fenti táptalaj 100—100 ml-es steril részletét tartalmazó 500 ml-es edénybe NRRL 5646 számú Norcardia sp. spórákat mosunk be ferde agar tenyészetről. Az edényeket rotációs rázógépre helyezzük és 28 °C-on 48 óra hosszat erélyes keverésben tartjuk. Az edényekben kapott tenyészetet 20 literes üvegfermentorban levő 12 liter steril táptalajhoz visszük. A levegőztetést steril levegővel végezzük. 48 óráig tartó tenyésztés után a fermentor tartalmát 300 literes tankfermentorban levő 150 liter steril táptalajhoz adjuk. A fermentációt steril levegő befúvatása mellett folytatjuk. A steril levegőt a fermentor aljába vezetjük be 1 liter/táptalaj liter/ perc sebességgel. Egyéb keverés nem szükséges. A fermentálás hőmérséklete 28 °C. Habzásgátló anyagként disznózsírolajat alkalmazunk. 53 óra után a tenyészetet végül 2000 literes fermentorban levő 1350 liter steril táptalaj leoltásához használjuk. 2. példa BM123x előállítása NRRL 5646 Norcardia sp fermentációjával A fermentációhoz az alábbi táptalajt alkalmazzuk: Bacto-pepton 10,0 g dextróz 10,0 g melasz 20,0 g ferriammónium-citrát 0,1 g kalciumkarbonát l,0g víz ad 1000 ml A táptalajt 120 °C-on 9 kg nyomással 60 percig gőzzel sterilezzük. A táptalaj pH-ja sterilezés után 6,7. 2000 literes fermentorban levő 1350 liter fenti táptalajt 150 liter, 1. példában leírt inokulummal leoltunk. A fermentációt 28 °C-on végezzük. Habzásgátló szerként disznózsírolajat alkalmazunk. A levegőztetést 0,6—0,7 liter steril levegő/liter táptalaj/perc sebességgel végezzük. A táptalajt 50 perc/ fordulatszámmal keverjük. 230 óra elteltével a fermentációt befejezzük és a biomasszát leszűrjük. A találmány szerint előállított hatóanyagokat különféle gyógyászati készítmények, így tabletta, 45 3. példa kapszula, drazsé formájában készíthetjük el. A készítményeket megfelelő vivőanyagok, kötőanyagok, töltőanyagok stb. felhasználásával állíthatjuk elő, kívánt esetben retardált hatóanyag-leadást biztosítva. A készítmények egy vagy több dózist tártai- 50 mázhatnak. 1. példa Inokulum-készítés Az elsődleges inokulum készítéséhez az aláb táptalajt alkalmazzuk: marhahúskivonat 3g Bacto-trypton 5g élesztő kivonat 5g keményítő 24 g dextróz lg víz ad 1000 ml A táptalaj pH-ját nátriumhidroxiddal 7,0-ra állítjuk. 55 60 65 BM123x elkülönítése A fermentációt a 2. példában leírtak szerint végezzük. 30 liter 7,7 pH-jú biomasszát 300 g diatómaföld alkalmazásával szűrjük. A szűrőlepényt vízzel mossuk, a szűrletet a mosóvízzel egyesítjük. A kapott 31 liter oldat pH-ját sósavval 6,5-re állítjuk. Az elegyhez 62 g nátriumfluoridot adunk és 1 óra hosszat keverjük. A kapott szuszpenziót 310 g diatómaföld alkalmazásával szűrjük. A kapott 31 liter szűrletet 11 ágytérfogatú IRC—50 (Na+) mm szemcseméretű gyantát tartalmazó oszlopon perkoláljuk. A gyantaoszlopot 4 liter vízzel mossuk. A gyantán levő BM123oe-t 0,3 n kénsavoldattal eluáljuk. 500 ml-es frakciókat fogunk fel. A hatóanyagot tartalmazó 1—7 frakciót egyesítjük, az oldat pH-ját báriumhidroxiddal 7,2 pH értékre állítjuk. A keletkezett báriumszulfátot szűréssel eltávolítjuk. A tiszta szűrletet 650 ml ágytérfogatú IRC—50 (H+) oszlopon bocsátjuk át. Az oszlopot 7