166709. lajstromszámú szabadalom • Immunológiai diagnosztikai reagens

7 166709 8 szerinti lehet, általában előnyösnek bizonyult a kb. 1,0—2,5 súly%-os koncentráció. A találmányt a következő példákban ismertetjük. 1. példa (a) 377 000 N.E. humán koriogonadotropin (HCG) port 65 ml steril vizes sóoldatban oldunk, az Oldatot 1 órán át 80 C°-on tartjuk, majd szobahőmérsékletre hűtjük. 60 ml lehűtött HCG-oldatot gyors ütemben egy Brookfield No. 1 keverővel (20 fordulatlperc) ellátott, 300 ml karboxilezett sztirbl-butadiéh-latexet (Dow No. 816) tartalmazó lombikba töltünk. A latex pH-értéke 9,3, fajsúlya 1,030, viszkozitása 100 cP. A latex koncentrációját 78—82 mg/ml értékre állítjuk be. Amint a HCG-t egyenletesen eloszlattuk a látexban, a lombikba 1,8 g l-ciklohexil-3-[2-morfolmiH4)-étil]-karb0diimid-meto-p-toluolszulfonát 180 ml vízzel készített oldatát adjuk. A reagenseket 2 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd 10 C°-on 25 000 g gyorsuláson centrifugáljuk. A felső folyadékréteget elöntjük, és a kapott latexszemcsékel kb. 400 ml vízben kb. ÍO percig őröljük, majd az elegyet kb. í ,5 órán át 10 C°-on, 25 Ö00 g gyorsuláson centrifugáljuk. A felső folyadékréteget elöntjük, és a szemcséket 400 ml pH = 8,2 értékű pufferoldatban (összetétel: 0,1 m Trisz-HCl, 0,85% NaCl és 0,1 m e-amino-n-kapronsav) szuszpendáljuk. A pufferolt szuszpenziót őröljük, és az őrleményt 1,5 órán át 10 C°-on, 25 000 g gyorsuláson centrifugáljuk. A felső folyadékréteget elöntjük, és a latex-szemcséket összegyűjtjük. A szemcsék átlagos részecskemérete kb. 0,20—0,25 u, , fajsúlya 1,01, HCG-tartalma 0,75 súly%: A terméket kéttartályos diagnosztikai reagens-csomagolásban szereljük ki. Az egyik tartályba a pufferolt HCG-hordozóanyag-reagenst, míg a másikba a HCG-antiszérum-reagenst töltjük. A tartályba előnyösen 2,2 ml HCG-hordozóanyag-reagehst töltünk pH =8,2 értékű pufferoldattal (összetétel: Trisz-HCl, NaCl, e-ámino-n-kapronsav és 0,01% Thimersal) képezett, 13,5 mg/ml koncentrációjú szuszpenzió formájában. A HCG-antiszérumot pH = 7,9—8,2 értékű pufferoldattal (összetétel: 0,1 m Trisz, 0,85% NaCl, 0,1 m e-amino-n-kapronsav, 1% bovin-albumin és 0,1% NaN2

) kb. 1: 60 arányban hígítjuk. A HCG-antiszérumot ismert módon állíthatjuk elő nyulakból. A nyulakat HCG-vel immunizáljuk, majd az antiszérumot elkülönítjük, meghatározzuk az antiszérum titerét, és a kész antiszérumot felhasználásig tároljuk. 2. példa 2 ml 6%-os humán albumin-szuszpenziót 50 ml desztillált vízzel hígítunk, és az elegyet 10 percig keverjük. A szuszpenzióhoz ezután 50% szilárd anyagot tartalmazó 8 ml karboxilezett sztirol-butadién-kopolimer szuszpenziót (Dow 816), majd 37 ml 0,1 mólos foszfátpuffer-oldatot (pH = 5,5) adunk, és az elegyet 10 percig keverjük. Ezután az elegyhez 160 ml 1%-os vizes 1-ciklohexil-3-[2-morfolinil-(4)-etil]-karbodiimid-meto-p-toluol szulfonát-oldatot adunk, és az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. A terméket centrifugálással elkülönítjük. Fehér, agyagszerű anyagot kapunk, amely kb. 0,2JA részeeskeméretű szemcsékből áll. A szemcsék fajsúlya 1,01, humán albumin-tartalma 10 súly%. A terméket 0,1 m Trisz-HCl-dal pH = 7,2—7,4 érték-5 re pufferolt, 0,1% karboximetilcellulózt tartalmazó só •oldatban szuszpendáljuk. Tejszerű, fehér szuszpenziót kapunk, amelyet diagnosztikai csomagolásban szerelhetünk ki. A kéttartályos diagnosztikai csomagolási egység 10 egyik tartályába 1,8 mg/ml koncentrációjú pufferolt vizes albumin-hordozóanyag szuszpenziót, míg a másikba megfelelően hígított humán albumin-antiszérumot (kecskéből izolált anyag) töltünk. Az egyes tartályok kb. 1—2 ml reagenst tartalmaznak. 15 A 2. példában ismertetett módon előállított reagensekkel a következőképpen mutatjuk ki a magzatszurok humán albumin-tartalmát: Üvegkémcsőbe 2 ml humán albumin-antiszérumot töltünk, majd a szérumhoz 1 ml magzatszurok-oldatot 20 (sóoldattal készült, 1: 50 térfogatarányú hígítás) adunk. A két oldatot elegyítjük, és az elegyet 10 percig 37 C°-on tartjuk. Az elegyhez ezután két csepp albumin-hordozóanyag szuszpenziót adunk, alaposan elkeverjük, és 1 órán át 37 C°-on tartjuk. Ezután meghatározzuk 25 a vizsgálat eredményét. Az agglutináció azt jelzi, hogy a magzatszurokban 16 u, g/ml-nél kisebb mennyiségű albumin van jelen, míg ha agglutináció nem lép fel, a magzatszurok 16 [xg/ml vagy nagyobb mennyiségű albumint tartalmaz. Ez az utóbbi humán albumin-kon-30 centráció a magzatszurokban abnormálisan magas; és ekkor az abnormális vagy kóros állapot, pl. cisztikus fibrózis felderítésére további vizsgálatokat végezhetünk. 35 3. példa Denaturált gamma-globulint állítunk elő a következe eljárással: Cohn II. frakciót desztillált vízzel 1% szilárd anyag-tartalomig hígítunk, a szuszpenziót éjszakán ál 40 szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 30 percig 10 000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk. A felse folyadékréteget elöntjük, és Whatman No. 1. szűrőpapíron szűrjük. 20 ml 1: 10 arányú vizes akrilnitril-latex szuszpenziói 45 (Hycar—Latex 1571) 20 ml, a fentiek szerint előállítót! 1%-os denaturált gamma-globulin eleggyel elegyítünk A szuszpenzióhoz 10 ml 1%-os vizes l-ciklohexil-3-[2 -morfolinil-(4)-etil]-karbodiimid-meto-p-toluolszulfonát oldatot adunk. A reakcióelegyet 10 percig 56 C°-ra fel 50 fűtött Vízfürdőn tartjuk. A kapott szuszpenziót 1 órár át 15 000 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk. A fel so folyadékréteget elöntjük, és a maradékot 50 ml 0,1 n glicin-nátriumklorid-pufferoldatban (pH =8,2) szusz pendáljuk. A szuszpenziót ismét centrifugáljuk. Fehér 55 agyagszerű anyagot kapunk. A termék átlagos szemcse mérete kb. 0,09^, fajsúlya 1,01, gamma-globulin-tartal ma 0,01—1%. A gamma-globulin — hordozóanyag részecskéket 0, mólos glicin-nátriumklorid-pufferoldatban (pH = 8,2 60 szuszpendáljuk és a szuszpenziót reumatoid artritis: kimutatására használjuk fel. A vizsgálatot a következő képpen végezzük: 50 X vizsgálati szérumot tiszta üveglapra helyezünk A szérumhoz egy csepp 0,1 mólos glicin-nátriumklorid 65 -pufferoldatot (pH = 8,2) adunk, és fapálcával össze 4