166709. lajstromszámú szabadalom • Immunológiai diagnosztikai reagens
3 166709 4 gálát esetén korlátozza a fenti módszer alkalmazhatóságát. Szükség van tehát olyan hordozóanyag kidolgozására, amely szerológiai szempontból közömbös, és amely a szerológiailag determináns anyagok széles választékával stabil, specifikus, érzékeny, vizuálisan könnyen észlelhető változást igen rövid idő alatt lehetővé tevő, diagnosztikailag felhasználható reagenst képez. A találmány vízben oldhatatlan immunológiai diagnosztikai reagensre vonatkozik. A reagens fajsúlya közel azonos a víz fajsúlyával. A reagens szerológiailag közömbös, diszkrét latex-polimer részecskékből áll, amelyekhez amid-kötéssel szerológiailag determináns, ismert anyagok kapcsolódnak. A találmány továbbá a fenti típusú reagensek előállítási eljárására vonatkozik, amelyet az jellemez, hogy a szerológiailag determináns anyagot vízben oldódó karbodiimid-vegyület jelenlétében, kb. 5—40 C° hőmérsékleten egy amidkötés kialakítására alkalmas reaktív csoportokat tartalmazó, szerológiailag közömbös latex-polimerrel hozzuk érintkezésbe. Azt találtuk, hogy sok szerológiailag determináns anyag, pl. a poliszacharidok az intakt fehérje-molekulák és peptidek, amelyeket fizikai módszerekkel nem lehet megfelelő mértékben kapcsolni a polimer latexhordozóanyagokhoz, amid-kötés kialakítása közben kovalens kémiai kötéssel kapcsolódhat egy meghatározott csoportba tartozó, szerológiailag közömbös polimer latex hordozóanyaghoz. A „szerológiailag determináns anyag" megjelölésen a leírásban olyan anyagokat értünk, amelyeket immunológiai módszerek felhasználásával mutathatunk ki emberi és állati testnedvekben. A találmány oltalmi köre valamennyi olyan szerológiailag determináns anyag alkalmazására kiterjed, amely karbodiimid kondenzálószer felhasználásával, amid-kötés kialakítása közben kémiailag kapcsolható egy szerológiailag közömbös latex-hordozóanyag-részecskéhez. A felhasználható szerológiailag determináns anyagok közül a következőket említjük meg: izolált emberi és állati antitestek, szérumkomponensek, toxinok, baktérium- és víruskomponensek, hormonok, enzimek, alkaloidok, sejt- és szövetkivonatok, kismolekulasúlyú anyagok, pl. inzulin, angiotenzin és urokináz, és hasonló anyagok. A diagnosztikai vizsgálatokban különösen előnyösen használhatjuk fel a következő anyagokat: humán koriogonadotropin, humán gamma-globulin és humán albumin. A szerológiailag közömbös polimer latex hordozóanyaghoz kapcsolódó szerológiailag determináns anyag mennyisége általában kb. 0,01 súly% és 15 súly% között változik. Az egyes tipikus szerológiailag determináns anyagokat olyan mennyiségben használjuk fel, amely a legmegfelelőbben alkalmazható a diagnosztikai vizsgálatban, ezért az egyes anyagokat a speciális követelményeknek megfelelő arányban egyesítjük a hordozóanyaggal. A találmány oltalmi köre ennek megfelelően olyan reagensekre is kiterjed, amelyek diagnosztikai szempontból megfelelő mennyiségű szerológiailag determináns anyagot tartalmaznak szerológiailag közömbös polimer latex-hordozóanyaghoz kötve. A „szerológiailag közömbös latex-polimerek" vagy „szerológiailag közömbös polimer latex hordozóanyagrészecskék" megjelölésen a következő sajátságokkal rendelkező latex-polimereket értjük: a polimerek vízben oldhatatlan, kb. 0,01—0,9 [i. szemcseméretű, a vizéhez közelálló fajsúlyú anyagok, amelyek fajsúlya a szerológiailag determináns anyaggal képezett kötés kialakulása után kb. 1,0, és így állandó vizes szuszpenziót képeznek. 5 A részecskéknek az immunológiai diagnosztikai vizsgálatok körülményei között közömbösnek kell lenniük, és megfelelő felületi töltéssűrűséggel kell rendelkezniük ahhoz, hogy a szerológiailag determináns anyaggal képezett kötés után egymást az aggregációt megakadá-10 lyozó mértékben taszítsák. A részecskéknek olyan reakcióképes csoportokat kell tartalmazniuk, amelyek a szerológiailag determináns anyaggal primer vagy szekunder amino-csoport és karboxil-csoport kondenzációja közben amid-kötést képesek kialakítani. így a po-15 limer hordozóanyagoknak karboxil-csoportokat, aminocsoportokat, vagy azokká alakítható csoportokat, vagy e csoportok kombinációját kell tartalmazniuk. A polimer hordozóanyagok közül különösen előnyösek az aktív hidrogénatomot, pl. —COOH, —CONH2 cso-20 portot, nitril-csoportot, szekunder amino-csoportot, primer amino-csoportot, vagy a felsorolt csoportok kombinációit tartalmazó anyagok. Az amid-kötést kialakító kémiai reakciót a találmány szerint vízben oldódó karbodiimid kondenzálószer 25 jelenlétében hajtjuk végre. A szerológiailag determináns anyaggal karbodiimidek hatására végbemenő kapcsolódás foka a polimerekben jelenlevő reakcióképes csoportok sűrűségétől függ. A reakcióképes csoportok sűrűsége a találmány megvalósítása szempontjából nem 30 döntő jelentőségű mindaddig, amíg a diagnosztikai vizsgálatokhoz szükséges mennyiségű szerológiailag determináns anyag megkötéséhez elegendő reakcióképes csoport áll rendelkezésre. Az alkalmazható hordozóanyag-részecskék típusai 35 közül a kereskedelemben „vizes latex-szuszpenzió" megjelöléssel forgalomba kerülő anyagokat említjük meg, amelyek általában kb. 40—60% szilárd anyagot tartalmaznak. A találmány szerint igen sokféle latex-polimert használhatunk fel, feltéve, hogy azok megfelelnek a fent 40 felsorolt követelményeknek. A találmány az összes megfelelő típusú latex felhasználására kiterjed. Az alkalmazható latex-polimerek közül a következőket említjük meg: karboxilezett sztirol-butadiének, karboxilezett sztirol-polimerek, karboxilezett, amino-45 csoportot hordozó polisztirolok, akrilsav-polimerek, metakrilsav-polimerek, akrilnitril-butadién-sztirol-polimerek, polivinilacetát-akrilátok, polivinil-piridinek, vinilklorid-akrilátok és hasonló anyagok. A találmány szerint felhasználható, kereskedelemben kapható latexek 50 közül példaként a következőket soroljuk fel: Amsco Res 4150, Amsco Res 3011 (American Mineral Spirits Co.); Dow Latex 815, Dow Latex 816, Dow Latex 620, Dow Latex 859 (The Dow Chemical Co.); Hycar 1512, Hycar 1877 x8, Hycar 2600x 120 (Goodrich Chemical Co.); 55 Gelva 900, Lytron 612, Lytron 624 (Monsanto); Rhoplex LC40, Amberlite Ultrafme (Rohm and Haas). A találmány szerint a szerológiailag determináns anyagokat kovalens kötéssel kapcsoljuk a diszkrét hordozóanyag-részecskékhez, R—N = C = N—R általános 60 képletű, vízben oldódó monokarbodiimid-kondenzálószerek, ill. azok savaddíciós sóinak vagy kvaterner aminovegyületeinek jelenlétében. A képletben R a gyűrűben 5 vagy 6 szénatomot tartalmazó cikloalkil-csoportot, 2—12 szénatomos alkil-csoportot (pl. etil-, n-65 -propil-, izopropil-, n-butil-, szek-butil-, izobutil-, 2
