166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
9 166686 10 gában ismert módszerrel nyerjük a bázisokat. Az utóbbiakból gyógyászatilag alkalmazható sókat képző savakkal reagáltatva, ismét sókat nyerhetünk, pl. szervetlen savakkal, pl. halogénhidrogénsavakkal, így sósavval vagy hidrogénbromiddal, perklórsavval, salétromsavval vagy tiociánsavval, kén- vagy foszforsavakkal, vagy szerves savakkal, pl. hangyasavval, ecetsavval, propionsavval, glikolsavval, tejsavval, piroszőlősavval, oxálsavval, malonsavval, borostyánkősavval, maleinsavval, fumársavval, almasavval, borkősavval, citromsavval, aszkorbinsavval, hidroximaleinsavval, dihidroximaleinsavval, benzoesavval, fenilecetsavval, 4-aminobenzoesavval, 4-hidroxibenzoesavval, antranilsavval, fahéjsavval, mandulasavval, szalicilsavval, 4-aminoszalicilsavval, 2-fenoxibenzoesavval, 2-acetoxibenzoesavval, metánszulfonsavval, etánszulfonsavval, hidroxietánszulfonsavval, benzolszulfonsavval, p-toluolszulfonsavval, naftalinszulfonsavval vagy szulfanilsavval alkotott sókat. A találmány szerint előállított peptideket gyógyászati készítmény alakjában használhatjuk fel. Ezek a peptideket valamilyen enterális vagy parenterális adagolásra alkalmas, gyógyászatban használatos, szerves vagy szervetlen hordozóanyaggal keverve tartalmazzák. Ilyen szempontból olyan anyagok jöhetnek számításba, melyek a polipeptidekkel nem reagálnak, pl. zselatin, tejcukor, glükóz, konyhasó, keményítő, magnéziumsztearát, talkum, növényi olajok, benzilalkoholok, gumi, polialkilénglikolok, vazelin, koleszterin vagy más ismert gyógyszerhordozó anyagok. A gyógyászati készítmények forgalomba hozhatók pl. liofilizátumként, vagy folyékony állapotban oldatként, szuszpenzióként vagy emulzióként. Adott esetben ezek sterilizáltak és/vagy segédanyagokat, pl. konzerváló-, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emulgeálószereket tartalmaznak. Tartalmazhatnak még a készítmények más, gyógyászatilag értékes anyagokat is. A találmányt a következő példákban ismertetjük, a hőmérsékleti értékeket Celsius fokokban adjuk meg. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok során a következő rendszereket alkalmaztuk: 43A rendszer: terc-amilalkohol-izopropanol-víz (100 : 40 : 10) 43C rendszer: terc-amilalkohol-izopropanol-víz (51: 21: 28) 45 rendszer: szek-butanol-3%-os vizes ammóniaoldat (70 : 30) 52 rendszer: n-butanol-jégecet-víz (75 : 7,5: 21) 52A rendszer: n-butanol-jégecet-víz (67 : 10 : 23) 79 rendszer: n-butanol-piridin-víz (34: 33 : 33) 87 rendszer: izopropanol-jégecet-víz (77 : 4 : 19) 89 rendszer: etilacetát-aceton-víz (72: 24 : 4) 100 rendszer: etilacetát-piridin-jégecet-víz (62:21:6 : 11) 102E rendszer: etilacetát-metiletilketon-jégecet-viz (50:30: 10: 10) 107 rendszer: etilacetát-piridin-víz (49 : 24: 27) 115 rendszer: etilacetát-piridin-hangyasav-víz (63 : 21 : 10 : 6) 121A rendszer: izopropanol-ammóniaoldat-víz (85 : 5 : 10) 1. rendszer: benzol-etanol (80 : 20) 2. rendszer: benzol-etanol (90 : 10) 4. rendszer: 10 15 20 30 35 40 45 50 55 60 65 n-amilalkohol-hangyasav-víz (70 : 20 : 10) n-butanol-ecetsav-víz (66,6 : 16,7 : 16,7) n-butanol-piridin-ecetsav-víz (66,6 : 12,5 : 4,2 : 16,7) n-amilalkohol-piridin-víz (70 : 20 : 10) kloroform-metanol-jégecet (87,4 : 9,7 : 2,9) benzol-etanol (70 : 30) benzol-etanol (60 : 40) A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatot szilikagélen, alumíniumoxidon („Alox" D—0, Firma Camag gyártmány, 8% gipsz tartalmú), vagy cellulózon („Seleeta" 1440, Schleicher és Schnell cég) végezzük. 1. példa 5. rendszer: 6. rendszer: 7. rendszer: 8. rendszer: 9. rendszer: 10. rendszer: H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nle-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 formját 25 (Nle8-kalcitonin M) formiát 500 mg finoman porított BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser--Thr-Cys-Nle-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(BtOu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 vegyületet intenzív keverés közben 10 ml jéghideg, tömény sósavban felveszünk. 10 perces, 0°-on történő állás után 50 ml vizet és 5 ml jégecetet adunk hozzá és az oldatot a klórionok eltávolítása céljából gyengén bázikus, acetátciklusú, Merck II ioncserélő gyantával töltött oszlopon szűrjük. Ezután n-oktanol hozzáadása közben forgó bepárlón szárazra pároljuk, a maradékot az oktanol eltávolítására petroléterrel többször dekantálás közben mossuk, szárítjuk, 0,1 n hangyasavban oldjuk, és tisztítás céljából 3,8 cm x 120 cm méretű Bio-gél P6 oszlopon kromatografáljuk. 10 ml-es frakciókat szedünk. Ezeknek tisztaságát alumíniumoxidon (az 52, 79 és 45 rendszerben) végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálattal ellenőrizzük; az egységes frakciókat egyesítjük és liofilizáljuk. Kitermelés: 96%. Vékonyrétegkromatogramban, szilikagélen Rf6 =0,44; alumíniumoxidon R f52 =0,55; Rf,9 =0,64; Rfí5 =0,45. A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 1. Z-Ala-Pro-OtBu 68,85 g Z-Ala-OH-vegyületet 550 ml dimetilformamidban oldunk, majd 43,3 m] trietilamint csepegtetünk hozzá. —15°-on 30,8 ml klórhangyasavetilésztert adunk hozzá, és a hőmérsékletet 10 perc alatt — 10°-ra emeljük. Ezután 52,65 g H-Pro-OtBu 105 ml dimetilformamidos, — 10°-ra hűtött oldatát csepegtetjük hozzá. 30 percig — 10°-on és 2,5 óráig 20°-on keverjük, egy éjszakán át hűtőszekrényben tartjuk, majd az oldószert 40°-on vákuumban lepároljuk. A maradékot vizes etilacetátban felvesszük, az oldatot 0.1 n sósavoldattal. **3
