166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
45 166686 46 24. Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH2 . hidroklorid 114 g Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-NH-NH-BOC vegyületet 57 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk, az oldatot 1 órán át állni hagyjuk, majd 9,8 ml 4 n sósavat adunk hozzá. Az oldatot 570 ml éterbe öntjük, és a maradékot vákuumban káliumhidroxid felett szárítjuk. A termék vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során szilikagéles lemezen Rre =0,25 értéket ad. 25. Z-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Vainly-Ala-Pro-NH2 11 g, a 24. pontban leírt hidrazidot 47 ml dimetilformamidban oldunk, és 15,6 ml 2,267 n tetrahidrofurános sósavoldattal és 1,57 ml amilnitrittel a 13. pontban leírt módon azidot képezünk. Az azidot 6 g, a 16. pontban előállított oktapeptidamid 70 ml dimetilformamidos oldatával és 5,5 ml trietilaminnal reagáltatjuk. A pH-érték 6,5. 7 nap múlva a reakcióelegyet leszűrjük, a szűrletet 710 ml etilacetátba öntjük, és a maradékot kétszer etilacetáttal eldörzsöljük. A termék 186°-on olvad, bomlás közben. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatban Rn =0,6. 26. Z-Lys(BOC)-Phe-OBzl 28. Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH 76,2 g Z-Asn-ONP vegyületet és 73,6 g H-Lys(BOC)-Phe-OH hidrokloridot 850 ml dimetilformamidban és 150 ml tetrahidrofuránban oldunk, —10°-ra hűtjük és az 5. pontban leírt módon 47,8 ml trietilamint adunk hozzá, 20 órán át 20°-on történő állás után 320 ml-re pároljuk be és a koncentrátumot 1435 ml jégecetbe és 359 ml 0,1 n sósavba öntjük. A csapadékot vizzel és éterrel mossuk. Op.: 167—168°. [a]g> = -11,7° (c = 2, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatban Rf7 = 0,7. 29. H-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH hidroklorid 34 g fenti terméket 240 ml metanolban oldunk és a 27. pontban leírt módon hidrogénezzük, azzal a különbséggel, hogy 2,5 óra múlva 13,3 ml 2 n tetrahidrofurános sósavoldatot és 20 óra múlva ismét 13,3 ml 2 n tetrahidrofurános sósavoldatot csepegtetünk hozzá. Az oldatot közvetlenül tovább alakítjuk. A termék Rfj értéke szilikagéles vékonyrétegen 0,6. 30. Z-Asp(OtBu)-Phe-OMe 100,84 g Z-Asp(OtBu)-OH diciklohexilammóniumsót 880 ml metilénkloridban oldunk, 43,16 g H-Phe-OMe hidrokloridot adunk hozzá és még 10 percig tovább keverjük. Ezután a szuszpenziót — 5°-ra hűtjük. 41,2 g diciklohexilkarbodiimid 120 ml metilénkloridos oldatát csepegtetjük hozzá, és a 26. pontban leírt módon feldolgozzuk. A maradékot metilénkloriddal mossuk. A termék szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rn = 0,9 értéket mutat. 33. H-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH hidroklorid 9,6 g 32. pontban nyert védett pentapeptidet 192 ml dimetilformamidban oldunk, és a 27. pont szerint hidrogénezzük, csak 4,43 ml 2,3 n tetrahidrofurános sósavoldatot használva. Szilikagéles vékonyrétegkromatogramon a termék Rf5 értéke 0,8. 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 261,6 g Z-Lys(BOC)-OH diciklohexilammóniumsót 6,4 liter acetonitrilben szuszpendálunk, 137,6 g H-Phe-OBzl hidrokloridot adunk hozzá, és a szuszpenziót 30 percig keverjük. — 5°-ra hűtjük és 96 g diciklohexilkarbodiimidet csepegtetünk hozzá. A szuszpenziót 20 óráig szobahőmérsékleten keverjük, leszűrjük, és a maradékot acetonitrülel mossuk. A szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradékot etilacetátban felvesszük, az oldatot 0,1 n sósavval, vízzel, 5%-os nátriumhidrogénkarbonátoldattal és vízzel mossuk, szárítjuk és bepároljuk. A maradékot etilacetát-hexán elegyből kikristályosítjuk. Op.: 101—103°. MD = —12,5° (c =2, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf2 =0,55. 27. H-Lys-(BOC)-Phe-OH hidroklorid 105,4 g fenti dipeptidésztert 630 ml dimetilformamidban oldunk, és a 2. pont szerint hidrogénezzük, azzal a különbséggel, hogy nem csepegtetünk hozzá jégecetet, viszont 2,5 óra múlva 150 ml 1,15 n tetrahidrofurános sósavoldatot csepegtetünk hozzá. A hidrogénezést 20 óráig végezzük. A termék szilikagéles vékonyrétegen Rf4 =0,7 értéket ad. 30 31. Z-Asp(OtBu)-Phe-NH-NH2 79,2 g fenti dipeptidésztert 1320 ml metanolban oldunk, az oldatot 0°-ra hűtjük és a 14. pontban leírt módon 21,1 ml hidrazinhidrátot adunk hozzá, de 3 napig 35 reagáltatjuk. A maradékot kétszer vízzel mossuk. OPp.: 143—145°. [a]£° = -22,2° (c = 2, dimetilformamidban). Vékonyrétegkromatográfia során szilikagéles lemezen Rn = 0,65. 3 2. Z-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH 54,4 g Z-Asp(OtBu)-Phe-NH-NH2 vegyületet 325 ml 45 dimetilformamibdan oldunk, és az azidot a 13. pontban leírt módon állítjuk elő, 111 ml 1,98 n tetrahidrofurános sósavoldattal és 14 ml izoamilnitrittel. 53,4 g H-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH hidrokloridot 28 ml dimetilformamidban és 50 ml trietilaminban oldunk, —10°-ra hűtünk 50 és hozzácsepegtetjük az azidoldatot. A pentapeptid származékot a maradékot etilacetáttal keverve kicsapjuk* és a maradékot víz-etanol (15 : 1) eleggyel mossuk. Op.: 189—190". [a&°= -21,8° (c = l, dimetilformamidban). Szilikagéles vékonyrétegen végzett kromatog-55 rafia során Rf6 = 0,77. 23
