166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
166686 tritilcsoporttal védjük. Az S-tritilcsoportokat a védett pepiidről szerves oldószerben szelektíven (a trifluorecetsavval lehasítható csoportok változatlanul hagyásával) merkuriacetáttal és kénhidrogénnel hasíthatjuk le. Az S-benzilcsoportokat szelektíven nátriummal folyékony ammóniás közegben hasíthatjuk le a védett pepiidről. Mindkét esetben szabad merkapto-csoportokat tartalmazó peptid keletkezik. Ezeket pl. jóddal jégecetben, dijódetánnal szerves oldószerekben, vagy a levegő oxigénjével folyékony ammóniás közegben védett diszulfiddá oxidálhatjuk. Különösen előnyös, ha a merkaptocsoportokat tritilcsoportokkal védjük, és ezeket a védett dipeptidről diszulfidhíd jóddal metanolos közegben történő egyidejű képzésével távolítjuk el, lásd Kamber és Rittel: Helv. Chim. Acta 51, 2061 (1968). A diszulfidgyűrű kialakítását végrehajthatjuk a mindkét Cys-csoportot tartalmazó részszekvencián, pl. az 1—10 dekapeptiden, vagy a dotriakontapeptid szakasznál is. A találmány szerinti eljárás b) kiviteli változatában a kiindulási anyagként alkalmazott nyíltláncú peptidet az a) változatban említett védőcsoportokkal állíthatjuk elő. Az S-tritilcsoportokat trifluorecetsavval távolíthatjuk el, és a szabad nyíltláncú peptidet az ismert módon káliumferricianiddal vizes oldatban, vagy jóddal, vagy levegővel folyékony ammóniás közegben oxidálhatjuk. A tritilcsoportokat azonban a fenti eljárás szerint jóddal és metanollal, és ezzel egyidejűleg diszulfidképzéssel is eltávolíthatjuk. Az N-acilszármazékok előállítása során az acilcsoportot aminovédőcsoportként használhatjuk. A keletkezett peptideket önmagában ismert módon utólag savaddíciós sóikká alakíthatjuk át. Az Na -acilszármazékok előállítására a szabad peptidet a szokásos módon N-acilezhetjük, pl. egy, az illető acilgyököt tartalmazó vegyes savanhidriddel vagy savaziddal, vagy mindenekelőtt egy aktivált észterrel, pl. fenil- vagy szubsztituált fenilészterrel reagáltatva. A savaddíciós sókat ismert módon állítjuk elő. A találmány tárgyát képezik az eljárásnak azok a kiviteli változatai is, melyek során az eljárás egy tetszőleges lépcsőjében keletkező közbenső termékből indulunk ki és a hiányzó lépéseket hajtjuk végre és/vagy egy kiindulási anyagot in situ képezünk és/vagy sója alakjában alkalmazunk. A kiindulási anyagként alkalmazott peptideket úgy állítjuk elő, hogy az aminosavakat, ha szükséges, könynyen lehasítható védőcsoportokat alkalmazva, egyenként vagy előzőleg kisebb peptidegységeket képezve összekapcsoljuk és adott esetben a szintézis egy tetszőleges lépésében kialakítjuk a diszulfid hidat. Célszerűen a hosszúszénláncú peptidek előállítására szolgáló, az irodalomban ismertetett kapcsolási módszerekkel dolgozunk, figyelembevéve a diszulfidhidat. Az aminosav- és/vagy peptidegységek kapcsolása pl. úgy történik, hogy egy védett a-aminocsoporttal és aktivált terminális karboxilcsoporttal rendelkező aminosavat vagy peptidet egy szabad oc-aminocsoportot és szabad vagy védett, pl. észterezett vagy amidált terminális karboxilcsoportot tartalmazó aminosavval vagy pepiiddel reagáltatunk, vagy egy aktivált a-aminocsoporttal és védett terminális karboxilcsoporttal rendelkező aminosavat vagy peptidet egy szabad terminális karboxilcsoportot és védett ac-aminocsoportot tartalmazó aminosavval vagy peptiddel reagáltatunk. A karboxilcsoportot pl. savaziddá-, -anhidriddé, -imidazoliddá vagy egy aktivált észterré, pl. ciánmetil-, tiofenil-, p-nitrofenil-, tiokrezilészterré, p-metánszulfonilfenil-, p-nitrofenil-, 2,4-dinitrofenil-, 2,4,5- vagy 2,4,6-triklórfenilészterré, pentaklórfenil-, N-hidroxiszukcinimidészterré, N-hid-5 roxiftálimidészterré, 8-hidroxikinolin- vagy N-hidroxipiperidinészterré átalakítva, vagy egy karbodiimiddel (adott esetben N-hidroxiszukcinimid hozzáadásával), vagy N,N'-karbonildiimidazollal vagy izoxazóliumsóval, pl. Woodward-reagenssel reagáltatva, az amino-10 csoportot pl. egy foszfittal reagáltatva aktiválhatjuk. Használatos módszer a karbodiimid módszer, a Weygand—Wünsch-eljárás (karbodiimid N-hidroxiszukcinimid jelenlétében), az azid módszer, az aktivált észter- és az anhidrid eljárás, továbbá a Merrifield-módszer 15 és az N-karboxianhidrid- vagy az N-tiokarboxianhidrid módszer. A végtermékek előállítása mellett ugyancsak a találmány oltalmi körébe tartozik a kiindulási anyagok, mindenekelőtt a diszulfidhidat tartalmazó peptidtöredé-20 kek előállítása, és ezeknek a kapcsolása a peptid fennmaradó részével. Ha a 10- vagy 12-helyzetű aminosav glicin, előnyös olyan szekvenciákból kiindulni, melyek az első 10-, illetve 12 N-terminális aminosavat tartalmazzák, és ezt az N-terminális részt kondenzálni az 25 egész maradék szekvenciával. Kapcsolhatjuk azonban az említett N-terminális szekvenciát a 28. aminosavig (glicinig) terjedő, szabad C-terminális karboxilcsoportot tartalmazó résszel is, majd az oktakozapeptidet a 29—32 aminosavból álló 30 tetrapeptidamiddal kondenzáljuk. Ezt a kondenzációt pl. a Weygand—Wünsch-eljárással végezhetjük. Ha az 1—10, illetve az 1—12 szekvencia kondenzációját a C-terminális 11—32, illetve 13—-32 szekvenciával végezzük, előnyösen a karbodiimid módszert vagy a 35 Weygand—Wünsch-eljárást alkalmazzuk. A következőkben az I általános képletű peptidek előállításának előnyös változatait ismertetjük, ahol az I általános képletű peptidben a 8. aminosav, Met-csoport, Val-, Nva-, Leu-, lie-, Nie- vagy Abn-csoporttal 40 helyettesített. Ezek a vázlatok speciális eljárási módszereket szemléltetnek, melyek önmagától értetődően ekvivalens eljárási módszerekkel helyettesíthetők. Az ábrákon és a példákban a következő jelöléseket használjuk: 45 1. azidmódszer 2. vegyes anhidrid módszer 3. aktivált észter módszer, főleg a p-nitrofenilészter (ONP) vagy hidroxiszukcinimidészter (OSU) 50 módszer 4. karbodiimid módszer 5. Weygand—Wünsch-módszer BOC terc-butiloxikarbonil-csoport DPC 2-(p-bifenilil)-izopropiloxikarbonil-csoport 55 Z karbobenzoxi csoport TRI tritil-csoport Bzl benzilcsoport OtBu terc-butilészter-csoport OBzl benzilészter-csoport 60 ONB p-nitrobenzilészter-csoport ONP p-nitrofenilészter-csoport OMe metilészter-csoport OEt etilészter-csoport OCP 2,4,5-triklórfenilészter 65 tBu terc-butiléter 3
