166551. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimek kinyerésére és tisztítására szintetikus polimerekkel (kopolimerekkel) történő kicsapás révén
166551 2. táblázat Polimer vegyület Szerk. Ms Stirol tartalom kopolimer átlag % Br-stirol akrilsav 20 000 15 Br-stirol N02 -stirol akrilsav 20 000 15 N02 -stirol Akrilsav-akrilnitril 20 000 Etilstirol akrilsav 20 000 15 Etilstirol 5% N02 -stirol 20 000 10 85% akrilsav Kicsapási pH Bacillus subtilis amiláz alk. proteáz proteáz kötési % Str. fradiae pronáz 5,0 4,5 5,0 4,5 5,0 4,5 5,0 4,5 5,0 4,5 50 64 33 52 34 62 90 99 99 100 32 27 44 65 19 20 30 41 18 0 30 0 80 73 97 97 97 97 98 98 10 25 0 20 0 10 0 10 10 30 3. táblázat Polimer vegyület Szerk. Ms átlag Stirol tart. % Kicsapási pH Bacillus subtilis amiláz neutr. proteáz alk. proteáz kötési % Str. fradiae pronáz Polimetakrilsav Polimetakrilsav Polimetakrilsav Metakrilsav-stirol kopolimer Metakrilsav metilmetakrilát kopolimer 40 000 20 000 MÜOÖ 20000 20 000 20 5,0 4,5 5,0 4,5 5,0 4,5 5,0 4,5 25 5,0 (MM. tart.) 4,5 , 80 93 73 98 78 83 57 90 52 74 58 0 87 0 50 0 95 0 66 0 81 0 45 0 87 0 36 0 67 0 0 0 55 68 0 0 0 0 62 63 Az enzimek kicsapásához mind a négy enzim esetében 0,5 súly/tf % polimert-kopolimert használtunk. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg, anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk. Példák: 1. Bacillus subtilis 24-órás tenyészetének alfa-amiláz aktivitása 540 SKBe/ml, neutrális proteáz aktivitása 250 PUK/ml. 50 liter 0 C°-ra hűtött fermentléhez 0,5 súly/tf % 20 000 átlag-molekulasúlyú polimetakrilsavat adunk (10%-os vizes oldatban) állandó keverés közben, a pH-t 2,0 mólos 3,6 pH-jú nátriumacetát-ecetsav pufferoldattal 4,5-re állítjuk be. A tömörülő csapadékot szeparátoron, vagy vákuum dobszűrőn szűrjük. A kapott nedves csapadék súlya 7,5 kg. Kettősfalú keverőtartályban 1% nátriumszulfátot tartalmazó 22,5 liter technikai acetont lehűtünk 0 C-ra, majd állandó keverés közben a nedves csapadékot a nátriumszulfát tartalmú acetonba adagoljuk. Vákuum szűrőn szűrünk, majd a kapott csapadékot vákuumban szobahőmérsékleten szárítjuk. A kapott por súlya 3,92 kg, specifikus aktivitása: alfa-amiláz 6760 SKBe/g neutrális proteáz 2550 PUK/g Kitermelés: alfa-amiláz 98% neutrális proteáz 80% 45 a fermentiere vonatkoztatva. 2. Mindenben az első példa szerint járunk el azzal a különbséggel, hogy a fermentációs folyadékot az enzimek kicsapása előtt, a biomassza eltávolítása céljából szeparáljuk, vagy vákuum dobszűrőn szűrjük. A kapott 50 por súlya 2,78 kg, specifikus aktivitása: alfa-amiláz 9150 SKBe/g neutrális proteáz 3600 PUK/g Kitermelés: alfa-amiláz 98% 55 neutrális proteáz 80% 3. Bacillus subtilis 24 órás tenyészetének alfa-amiláz aktivitása 652/SKBe/ml, neutrális proteáz aktivitása 243 PUK/ml. 50 liter fermentléből kiindulva az enzimek kicsapását az 1. példa szerint végezzük el, majd az elvá-60 lasztott csapadékot (6,45 kg) hűtés mellett 0 C°-os 19,5 liter technikai acetonba keverjük. A csapadékot szűrés után vákuumban szobahőmérsékleten szárítjuk. A kapott por súlya 3,2 kg, specifikus aktivitása: alfa-amiláz 9705 SKBe/g 65 neutrális proteáz 2651 PUK/g 3
