166496. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nitrokinazolinon-származékok előállítására

11 166496 12 alkalmazott tápközeget kiöntöttük és 1,1 X 104 egység Vaccinia-virus IHD törzset vittünk rá az egyes kémcsövekben levő kultúrákra. A vírussal kezelt egysejtes sejtréteghez 2% borjúszérumot tartalmazó Eagle-féle laktalbumin-tápközeget adtunk és a vizsgált vegyületeket adtuk ehhez a készítményhez megfelelő koncentrációban (az alkalmazott koncentrációkat az alábbi I. táblázatban szereplő értékeknek megfelelő nagyságrendben választottuk meg). A kultúrát 37 C

C hőmérsékleten 3 napig inkubáltattuk, majd mikroszkóppal megfigyeltük a mutatkozó citopatogén hatásokat. A vizsgált vegyületek vírusellenes aktivitását a [Ag/ml egységekben kifejezett minimális gátló koncentrációban (MIG), toxikus hatásukat pedig az ugyancsak jj,g/ml egységekben kifejezett minimális toxikus koncentrációban (MTK) adtuk meg. Az e kísérletek során kapott eredményeket az alábbi I. táblázatban foglaltuk össze. A táblázatban összehasonlításul megadtuk az ismert metizazonnal ugyanilyen módon kapott értékeket is; a táblázat adataiból világosan kitűnik, hogy valamennyi, a táblázatban szereplő és a találmány szerint előállított új vegyület a metizazonnal kedvezőbb kemoterápiás indexet, tehát MTK/MIG értéket mutat. I. táblázat Az új vegyületek hatása a Vaccinia-vírus szaporodására csirke-embrió fibroblaszt-sejtkultúrában Vegyület sorsz. MIG (ig/ml MTK Ug/ml Kemoterápiás index MTK/MIG í. 0,2 >100 >500 2: 0,2 50 250 3. 1,0 100 100 4. 1,25 >100 > 80 Metizazon 5,0 20 4 10 15 20 Megjegyzés: A táblázat első oszlopában szereplő sorszámok az alábbi IV. táblázat megfelelő számaira utalnak. MIG: minimális gátló koncentráció MTK: minimális toxikus koncentráció Sejtek: csirke-embrió fibroblaszt-sejtek Vírus: Vaccinia-vírus IHD törzs, 1,1 X 10* E kémcsövenként Megfigyelés: 3 napos inkubáció (37 °C-on) után mikroszkóppal. 10. példa A terápiás hatás vizsgálata, egéren, kísérletileg kiváltott Vaccinia fertőzéssel. Háromhetes hím egereket (ICR törzs) alkalmaztunk a kísérlethez. 2,2 X104 E Vaccinia-vírust (IHD törzs) adtunk be intranazális úton mindegyik állatnak. Az állatokat 2 órával a fertőzés előtt, valamint 4, 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88 és 100 órával a fertőzés után orális vagy szubkután úton kezeltük a vizsgált vegyületekkel. Ezután az egereket a fertőzéstől számított 12 napon keresztül megfigyelés alatt tartottuk. A kísérleti eredményeket, az egerek túlélésének százalékarányában kifejezve az alábbi II. táblázatban foglaltuk össze. A vizsgált 1. és 4. sz. új vegyületek az összehasonlításul ugyanilyen kísérleti módszerrel alkalmazott metizazonnal kedvezőbbeknek mondhatók, minthogy nemcsak ugyanolyan jó hatást mutatnak, hanem teljesen mentesek a mellékhatásoktól. így például a 4. sz. vegyület akut toxikussága egéren, intraperitoneális injekció útján történő beadás esetén lényegesen kisebb, mint a metizazoné, ami világosan kitűnik az alábbi III. táblázat adataiból is. A metizazonnal kezelt egerek esetében súlyos gasztroduodenális haemorrhagia és bélfekélyek képződése volt megfigyelhető, a kísérlet során elhullott egerek boncolása során. Ezzel szemben a találmány szerinti új vegyületekkel kezelt állatokon sem haemorrhagia, sem fekélyképződés jelei nem voltak a boncolás során észlelhetők. Az eredményeket a II. táblázat tartalmazza. II. táblázat Terápiás hatás egéren, kísérleti úton kiváltott Vaccinia-vírus fertőzés esetén 25 „. „ Túlélés %-ban Vizsgált vegyület p.o. s. c. í. 4. 30 Metizazon Fertőzött, gyógyszerrel nem kezelt állatok 100 100 0 100 100 100 0 35 40 45 50 55 60 65 Megjegyzés: Állatok: 3 hetes hím egerek (IRC törzs) csoportonként 8 egér Vírus: Vaccinia-vírus, IHD törzs Fertőzés: 2,2 X 104 E állatonként, intranazális úton Kezelés: 100 mg/kg orális (p. o.) vagy szubkután úton (s. a); 2 órával a fertőzés előtt, majd 4, 16, 28, 40, 52, 64, 76, 88 és 100 órával a fertőzés után Megfigyelési időszak: 12 nap a fertőzés után. 7/7. táblázat Akut toxikusság egéren, metizazonnal összehasonlítva A túlélő/vizsgált állatok számaránya (xg/kg 4. sz. vegyület metizazon 1000 2000 5/5 4/5 3/5 0/5 Megjegyzés a táblázathoz: Kísérleti állatok: ddH-törzsű hím egerek, egyenkénti súly 17—20 g. Beadás módja: intraperitoneálisan, 0,5%-os karboximetil-cellulóz-oldatban szuszpendálva. Megfigyelési idő: a beadás utáni 7. napon. Az I.—III. táblázatban ismertetett kísérletek során alkalmazott vegyületek kémiai szerkezete: valamennyi vegyület az (I) általános képletnek felel meg; a nitrocsoport valamennyi vegyületben a 6-hely-