166456. lajstromszámú szabadalom • Berendezés mikroorganizmusok vizsgálatára

5 166456 6 A tápközeg tetszés szerinti önmagában ismert vagy ismert összetétel módosításával kapott közeg lehet, feltéve, hogy a vizsgálathoz alkalmas környezetet biztosít. Félkvantitatív vizsgálathoz előnyösen alkalmazhatjuk a „Difco Laboratories" cég (Detroit, Michigan, USA) által forgalombahozott „Bacto Brain Heart Infusion" tápközeget. Ez a tápközeg általánosan alkalmazható, a legtöbb mikroorganizmus tenyésztésére alkalmas. Differenciáló vizsgálat végzésekor a tápközeget úgy választjuk meg, hogy az bizonyos mikroorganizmusok jelenlétében pozitív, mások esetében negatív eredményt mutasson. Ilyen tápközegekre példaként a Journal of Bacteriology c. folyóiratban ismertetett közleményt (¥2,461) említhetjük meg. A közlemény szerinti tápközeg a Proteus törzs tagjaira pozitív reakciót ad, egyéb Gram-negatív baktériumok azonban nem szaporodnak benne. Hasonlóképpen differenciáló tulajdonságú a „Simmon's Citrate" tápközeg, (összetételét a 4. példában adtuk meg) amely citrát-felhasználó organizmusok, így Klebsiella és Aerobacter genus-beli mikroorganizmusok tenyésztésére alkalmas, a citrátot nem metabolizáló organizmusok azonban nem szaporodnak benne. Az alkalmazott reagens előnyösen olyan indikátor, amely a mikroorganizmus szaporodása esetén biztosítja a 11. szűrőpapír színváltozását. A reagenst célszerűen összekeverjük a tápközeggel. Reagensként például közönséges pH-indikátor, így a Christensen-féle közegben általánosan alkalmazott fenolvörös alkalmazható. Ez az indikátor olyan mikroorganizmus jelenlétében, amely a tápközeg karbamidját lebontja, színét világos narancsszínről élénk rózsaszínűre változtatja. Ez a színátcsapás például Proteus genus-beli mikroorganizmusok hatására megy végbe. A reagens adott esetben redox típusú indikátor lehet, így valamely tetrazólium-származék, például 2,3,5-tri-feniltetrazólium-klorid. Ezt a terméket a legtöbb mikroorganizmus növekedése során intenzív vörös színű formazánná (trifenilformazánná) redukálja. Ha félkvantitatív vizsgálat végzésére alkalmas 11. szűrőpapírt kívánunk előállítani, a trifeniltetrazólium indikátor alkalmazása azért is előnyös, mert a redukált termék, a trifenilformazán nemcsak könnyen látható, élénk színnel rendelkezik, hanem oldhatatlan is. A festék oldhatatlansága és az említett szuszpendálószer alkalmazása megkönnyíti az elkülönült és jól látható telepek keletkezését. A szuszpendálószert azért kell hozzáadni az impregnálószerhez, hogy megakadályozzuk az oldható közeg és reagens kioldódását all. szűrőpapírból a folyékony mintába történő bemerítés során és hogy az inokuláció után rögzítsük a mikroorganizmusokat all. szűrőpapíron. A szuszpendálószernek az a tulajdonsága, hogy a mikroorganizmusokat rögzíti, s így lehetővé teszi elkülönült és jól megfigyelhető telepek kialakulását all. szűrőpapíron, különösen a félkvantitatív vizsgálatok esetében fontos. A szuszpendálószert az impregnálásra alkalmazott összetételben 0,1—5,0 súly%, előnyösen 0,5—3, súly% mennyiségben alkalmazzuk. Szuszpendálószerként vizes oldatban oldható, viszkózus kolloid szuszpenziót képező szert alkalmazunk. Ilyen — önmagukban vagy egymással kombinálva — alkalmazható szuszpendálószerek például a kolloidok, a közömbös gumiféleségek, a karrageninek, alginátok, poliszahharidok és polipeptidek. Az impregnálás után all. szűrőpapírt megszárítjuk. Mivel a nagy hőmérséklet az impregnálás során a hordozóanyagba bevitt tápanyagokat és reagenseket károsíthatja, az impregnált hordozóanyag szárítását előnyösen vákuumban vagy mesterséges levegőcirkálultatás mellett 40—60 °C hőmérsékleten végezzük. A szárítás ideje előnyösen 1—3 óra. 5 A kényelmesen alkalmazható 10. vizsgálati berendezés előállítására all. impregnált szűrőpapírt a 12. fogantyúval vagy nyéllel látjuk el. A 12. fogantyú előnyösen merev, oldhatatlan anyagból, például polietiléntereftalátból vagy hasonló anyagból készült darab lehet. Mivel all. 10 hordozóanyagot inkább mikrobiológiai, mint kémiai vizsgálatok céljára alkalmazzuk, különös figyelmet kell arra fordítani, hogy all. szűrőpapírt mikrobiológiailag közömbös ragasztóanyaggal erősítsük a 12. fogantyúhoz. Erre a célra alkalmazhatók például a „3M Com-15 pany" cég (Minneapolis, Minnesota, USA) cég kereskedelmi forgalomban kapható, kétoldalt ragasztóval ellátott szalagjai, így a „415" és a „419" elnevezésű szalagok. Azt találtuk továbbá, hogy all. szűrőpapírt hőkötéssel is könnyen rögzíthetjük a 12. fogantyúhoz. Ez a 20 rögzítési mód sem a hordozóanyagot, sem az impregnálószert vagy a reagenst nem károsítja. A rögzítés megkönnyítésére a 12. fogantyú és a 11. szűrőpapír közé — a 2. ábrán látható módon — vékony polietilén lemezt (14) helyezünk, majd a fogantyúnak a szűrőpapírral ellenté-25 tes 16. oldalát melegítjük. Ilyen módon elérhető, hogy a 14. lemez megolvadjon és összekösse all. szűrőpapírt és a 12. fogantyút. A 11. szűrőpapírt (1.) és a hozzáerősített 12. fogantyút ezután a 13. leforrasztható tartályba helyezzük, 30 sterilizáljuk, majd a tartályt leforrasztjuk. A hordozóanyaghoz általában bármely ismételten lezárható tartály alkalmazható. A tapasztalat szerint tartályként igen előnyösen használható a 17., 18. széleken és a 19. alsó részén leforrasztható tartály. A 13. tartály vagy burkolat 35 felső részét célszerűen önmagában ismert egymásra simuló zárólapokkal (22) látjuk el, ezek nyomás hatására súrlódás révén lezárják a 13. tartályt. Ilyen módon nincs szükség különleges forrasztóberendezés alkalmazására. A 13. tartály anyaga előnyösen átlátszó: ennek követ-40 keztében a vizsgálatot végző személy anélkül figyelheti meg és olvashatja le a tartályon belüli 11. szűrőpapírt, hogy önmagát vagy a laboratóriumot kitenné a tenyésztett mikroorganizmussal történő szennyeződés veszélyének. 45 A használat során a nyitott 13. tartályból a steril 12. fogantyút és 11. szűrőpapírt kivesszük és a hordozóanyagot a vizsgálni kívánt folyékony mintába, így vizeletbe, tejbe, vízbe, stb. mártva rehidratáljuk és inokuláljuk. A mikroorganizmusokkal beoltott 11. szűrőpapírt és 50 a hozzá csatlakozó 12. fogantyút aszeptikus körülmények között visszahelyezzük a 13. tartályba, a tartályt lezárjuk és a feltételezett mikroorganizmustól függően az optimális hőmérsékleten legalább 4 órán keresztül inkubáljuk. A legtöbb mikroorganizmus optimális inku-55 bálási hőmérséklete 4—40 °C között, általában 35—39 °C között van. Az inkubálási idő eltelte után all. szűrőpapírt vizuálisan megvizsgáljuk és a vizsgálat eredményét „leolvassuk". Ha félkvantitatív vizsgálatot végzünk, akkor — a később ismertetendők szerint — a telepeket 60 jelző színes foltok számát és a színeződés intenzitását állapítjuk meg. Differenciáló vizsgálat végzése esetén a hordozóanyag színét állapítjuk meg, ez jelzi a tenyésztés pozitív vagy negatív eredményét. A vizsgálat lezárása után a 10. berendezést sterilizáljuk és kidobjuk. A ta-65 pasztalat szerint azonban a sterilizálás általában nem 3