166418. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,4-BISZ (1'-alkil-5'-nitro-imidazolil-2'-metilén-imino)- piperazinok és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

166418 3 4 jobb hatást fejtenek ki Trichomonasok és amőbák ellen. Ez a hatás a következő táblázatokból egyértelműen kivehető. 1. Hatáspélda A Trichomonas foetus ellen kifejtett hatást mindkét nembeli albínó egereken (NMRI) vizsgáljuk, amelyeket saját tenyészetből választunk a kísérlethez. Az állatok súlya 10 és 12 g közötti. A vizsgált anyag alkalmazása perorálisan nyelőcsőszonda segítségével vizes oldatban vagy nehezen vízoldható vegyületeknél tilóz-szuszpenzióban történik. Összesen 2 darab egyszeri dózist adunk be, az első dózist 2 órával a fertőzés előtt, a második dózist 2 órával a fertőzés után. Egy-egy vizsgált anyag és dózis kipróbálása esetén mindenkor 4—4 egeret alkalmazunk. Az állatokat intraperitoneálisan fertőzzük, 19 millió kórokozó/állat adaggal, amelyet 0,5 ml „Merck I" tenyészetben szuszpendálunk. A standard Metronidazolt ugyanúgy adagoljuk és ugyanúgy alkalmazzuk, mint a vizsgált hatóanyagot (vö. 1. táblázat). Fertőzött kontrollként általában 10 egeret alkalmazunk, amelyeket a fertőzés után már semmiféle kezelésben nem részesítünk. 5 további kísérleti állatot 0-kontrollként alkalmazunk (nem kezelt, nem fertőzött állatok). 6 nappal a fertőzés után a kísérleti állatokat megöljük és a hashártyaizzadmányt Trichomonadokra vizsgáljuk. Az előzőleg elhullott egereken hasonló vizsgálatot végzünk. A hashártyaizzadmányban a fertőzés után a 6. napon észlelt kórokozósűrűség alapján minősítjük a vizsgált anyagot. A minősítésnél úgy járunk el, hogy a vizsgált készítménynél tapasztalt kórokozósűrűséget összehasonlítjuk a standarddal és a fertőzött-kontrollal. A minősítő szám jelentése a vizsgált anyag és a standard észlelt kórokozósűrűségének kiértékelésekor a következő: Hatástalan: kórokozósűrűség a fertőzött kontrollhoz képest számottevő mértékben nem csökken. Minősítő szám: 3, 4. 1. táblázat Készítmény Dózis mg/kg egér per os Kórokozósűrüség Trichomonas foetus 4 egéren vizsgálva i 2 xl50 0 0 0 0 2 xlOO 0 0 0 0 2 x50 0 0 0 0 2 X25 0 1 0 2 ii 2 X150 0 0 0 0 2 xlOO 0 0 0 0 2 X50 0 0 0 0 2 x25 2 0 2 1 Fertőzött kontroll — 4 4 4 4 1= Találmány szerinti termék: l,4-bisz-(r-metil-5'-nitro-ímidazolil-2'-rnetilén-immo)-piperazin; II ~ Összehasonlító készítmény; Metronidazol, Hatásos: a) alig észlelhető: kórokozósűrűség a fertőzött kontrollhoz képest kisebb mértékben csökken, minő-5 sítő szám: 2; b) nem kielégítő: a kórokozósűrűség a fertőzött kontrollhoz képest számottevő mértékben csökken, minősítő szám: 1; c)jó: kórokozó nem mutatható ki, 10 minősítő szám: 0. 2. hatáspélda 15 Az Entamoeba histolytica elleni hatás vizsgálatát általában különböző tenyészetekből származó mindkét nembeli aranyhörcsögön végezzük. Az állatok testsúlya általában 50 és 60 g közötti. 20 A vizsgált anyagot perorálisan nyelőcsőszonda segítségével vizes oldatban, gyenge vízoldhatóságú vegyületeknél tilóz-szuszpenzióban adjuk be. Összesen 4 darab egyszeri dózist alkalmazunk akként, hogy az első dózist 2 órával a fertőzés előtt, a második dózist 2 órával, a 25 harmadik dózist 1 nappal, a negyedik dózist pedig 2 nappal a fertőzés után adjuk be. Egy-egy vizsgált anyagnál mindenkor 4—4 aranyhörcsögből álló csoportot vizsgálunk. 30 Az állatokat intrahepatikus úton 130 000 kórokozó/ állat adaggal fertőzzük. A standard Metronidazolt a vizsgált anyaghoz hasonlóan adagoljuk és alkalmazzuk (vö. 2. táblázat). 35 Fertőzött kontrollként általában 10 aranyhörcsögöt alkalmazunk, amelyek a fertőzés után már semmiféle kezelésben nem részesülnek. 5 további kísérleti állatot 0-kontrollként (nem kezelt, nem fertőzött állatok) alkalmazunk. 40 Legkorábban 6 nappal, legkésőbben pedig 8 nappal a fertőzés után az összes kísérleti állatot megöljük. A hatás kiértékelését a májban kialakult májzsugorodás mértéke után ítéljük meg. Az előzőleg elhullott arany-45 hörcsögöket azonos vizsgálatnak vetjük alá. A vizsgált készítmény és a standard, máj-vizsgálatakor észlelt hatását összehasonlítjuk a fertőzött kontrollal. A májnál észlelt hatás minősítését a vizsgált és a standard készítménynél a következőképpen végezzük: 50 Hatástalan: májnekrózis a fertőzött kontrollhoz képest nem mutat számottevő különbséget. Lehetséges minősítő szám: 3, 4. 55 Hatásos: a) alig észlelhető: májnekrózis kisebb mértékben fejlődik ki, mint a fertőzött kontrolinál. Lehetséges minősítő szám leggyakrabban 2, ritkán 1. 60 b) nem kielégítő: májnekrózis a fertőzött kontrollhoz képest számottevő mértékben csökken, lehetséges minősítő szám: 0 (ritkán); túlnyomórészben 1; 2 (ritkán) c)jó: májnekrózis nem tapasztalható, 65 Minősítő szám; 0, 2