166412. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum előállítására
15 1. táblázat ISP táptalajok 1. táptalaj. Tripton-élesztőextrakt táptalaj Bacto-tripton (Difco) 5,0 g Bacto-élesztő-extrakt (Difco) 3,0 g Desztillált víz 1,01 pH 5,0—7,2 autoklávozás előtt. 5 ml táptalajt legalább 20 mm átmérőjű kémcsövekbe töltünk. 166412 10 16 5. táptalaj. Glicerin-aszparagin agar L-aszparagin (vízmentes bázis) Glicerin Ka HP0 4 (vízmentes bázis) Desztillált víz Nyomelem oldat (3. táptalaj szerinti) 1,0 g 10,0 g 1,0 g 1,01 1,0 ml Az oldat pH-ja kb. 7,0-nem kell beállítani. Agar -7,4. Amennyiben ettől eltér, 20,0 g 2. táptalaj. Élesztőextrakt-malátaextrakt agar Bacto-élesztőextrakt (Difco) 4,0 g Bacto-malátaextrakt (Difco) 10,0 g Bacto-dextróz (Difco) 4,0 g Desztillált víz 1,01 A pH-t 7,3-ra állítjuk be, majd hozzáadjuk a Bacto-agart 15 Az agart 100 C°-on 15—20 percen át tartó gőzöléssel elfolyósítjuk. 6. táptalaj. Pepton-élesztőextrakt vas agar Bacto-pepton vas agar dehidratált (Difco) Bacto-élesztőextrakt (Difco) 20,0 g 20 Desztillált víz 36,0 g 1,0 g 1,01 Az agart 100 C°-on 15—20 percen át tartó gőzöléssel elfolyósítjuk. Megfelelő mennyiségű táptalajt ferde öntésre tenyészetenként legalább 6 kémcsőbe töltünk. Autoklávban sterilezzük, lehűtjük. 25 A pH autoklávozás előtt 7,0—7,2, szükség esetén erre az értékre beállítandó. Az agart 100 C°-on 15—20 percen át tartó gőzöléssel elfolyósítjuk. 7. táptalaj. Tirozin-agar 3. táptalaj. Zabliszt agar Zabliszt Agar 20 g 18 g 20 g zablisztet 1000 ml desztillált vízben 20 percen át főzünk vagy sterilezünk. Ruhán átszűrjük. A szűrlet térfogatát desztillált vízzel 1000 ml-re egészítjük ki. Ezután nyomelem-oldatot adunk hozzá (1,0 ml oldat, melynek 100 ml-re, 0,1—0,1 g FeS04 • 7 H2 0-t, MnCl 2 • 4 H2 0-t és ZnS04 0 • 7 Ha O-t tartalmaz). A pH-t NaOH-val 7,2-re állítjuk be. 18 g agart adunk hozzá; 100 C°-on 15—20 perces gőzöléssel elfolyósítjuk. 30 35 40 Glicerin 15,0 g L-tirozin (Difco) 0,5 g L-aszparagin (Difco) 1,0 g K2 HP0 4 (vízmentes anyag) 0,5 g MgS04 • 7 H2 0 0,5 g NaCl 0,5 g FeS04 • 7 H2 0 0,01 g Desztillált víz 1,0 1 Nyomelem-oldat (a 3. táptalaj szerinti oldat) 1,0 ml A pH-t 7,2—7,4-re állítjuk be. Bacto-agar 20,0 g 100 C°-on 15—20 percen át tartó gőzöléssel elfolyósítjuk. 4. táptalaj. Szervetlen só-keményítő agar 45 Nyomelem-oldat (a 3., 4., felhasználható) 5. és 7. táptalajnál közvetlenül bői kevés hideg desztillált vízzel csirizt készítünk és FeS04 -7H 2 0 500 ml-re feltöltjük. 50 MnCl2 • 4 H2 0 ZnS04 • 7 H2 0 II. oldat: Desztillált víz K2 HP0 4 (vízmentes bázis) 1,0 g MgS04 • 7 H2 0 1,0 g NaCl 1,0 g Paradicsompü (NH4 ) 2 S0 4 2,0 g 55 CaCOg 2,0 g Glükóz Desztillált víz 500 ml K2 HP0 4 Nyomelem-oldat (3. táptalaj szerinti) 1,0 ml Paradicsompüré pH 7,0—7,4. Ha ettől eltér, nem kell beállítani. Wilson pepton A keményítő szuszpenziót a sóoldattal ele-60 CaCOg gyítjük. Agar Hozzáadunk agart (Difco) 20,0 g Csapvíz 0,1 g 0,0 g 0,1 g 100,0 ml 10,0 g 1,0 g 20,0 g 1,0 g 2,0 g 15,0 g 1000,0 ml Az agart 100 C°-on 15—20 percen át végzett gőzöléssel elfolyósítjuk. 65 30 percen át 1 atm nyomáson sterilezzük. A pH-t 6,9' állítjuk be. •re 8
