166407. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fokozottan vízoldékony peptidamidok és azok származékainak előállítására
166407 13 14 éterrel kristályosítjuk, szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 26,5 g (86%) 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzofenonoximot kapunk. Op.: 144—145 C°. 3. lépés: 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzhidril-amin-2,4,5--triklór-fenolát 21,0 g (66,2 mmól) oximot (6. példa, 2 lépés) szuszpendálunk 350 ml tömény (kb. 25%-os) ammóniumhidroxidban, hozzáadunk 75 ml etanolt, 24 g (31 mmól) ammónium-acetátot és 20 cink-port. A reakcióelegyet négy órán át forraljuk jól húzó fülkében, majd az etanolt kidesztilláljuk és a maradék szuszpenziót szűrjük. A csapadékot a szűrőn mossuk 3 x 200 ml éterrel. Az éteres oldatot nátrium-szulfáton megszárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A párlási maradékot feloldjuk 200 ml éterben és hozzáadunk 14 g (71 mmól) 2,4,5-triklór-fenolt. A kivált triklórfenolátot szűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 25 g (75%) 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzhidrilamin-2,4,5-triklór-fenolátot (röviden: Tbh-NH2 -HOTCP-t kapunk. Op.: 108—110 C°. 4. lépés: Z-Pro-NH-TBh 6,23 g (25 mmól) karbobenzoxi-prolint és 12,7 g (26 mmól) Tbh-NH2 .HOTCP-t (6. példa, 3. lépés) feloldunk 50 ml metilénkloridban és hozzáadunk 5,4 g (26 mmól) diciklohexilkarbodiimidet jeges víz hűtés közben. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten hagyjuk állni, éjszakán át, majd a kivált diciklohexilkarbamidot kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a maradékot éterrel kristályosítjuk. A kristályos anyagot kiszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 12,7 g (95%) védett prolin-amidot kapunk. Op.: 108—110 C°. 5. lépés: H-His-Pro-NH-Tbh.2(COOH)2 10,7 g (20 mmól) Z-Pro-NH-Tbh-t (6. példa, 4 lépés) feloldunk 100 ml dimetilformamidban és csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. (R f értékek n-hexán-etilacetát 3: 1 rendszerben: karbo-benzoxi-vegyület: 0,40—0,45, H-Pro-NH-Tbh: 0,0). A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, a dimetilformamid-oldatot betöményítjük csökkentett nyomáson kb. 20 ml-re, majd hozzáadunk 12,05 g (20 mmól) védett hisztidin aktív észtert (5. példa, 1. lépés). A továbbiakban az 5. példa 2. lépésében leírt módon járunk el úgy, hogy a védett dipeptidamid hidrogenolízisénél 3,6 g (40 mmól) vízmentes oxálsavat használunk. 12,2 g (85%) terméket kapunk. Op.: (zsugorodik 135 C°-on) 165 C°, R| 0,12—0,15. 6. lépés: Z-Pyr-His-Pro-NH-Tbh Az 5. példa 3. lépésében leírt módon reagáltatunk 7,17 g (10 mmól) dipeptid-oxalátot (6. példa, 5. lépés) és 4,45 g (10 mmól) karbobenzoxi-piroglutaminsav-2,4,5--triklórfenilésztert 5,6 ml (40 mmól) trietilamint tartalmazó 20 ml dimetilformamidban. A feldolgozás után 6,35 g (81%) terméket kapunk. Op.: 125 C° (bomlik). R<? 0,58—0,62. 7. lépés: Pyr-His-Pro-NH2 3,95 g (5 mmól) védett tripeptiamidról (6. példa, 6. lépés) az 5. példa 4. lépésében megadott módon távolítjuk el a védőcsoportokat úgy, hogy a tripeptid- trifluoracetátból a szabad-trjpeptidet szabadítjuk fel Amberlite IRA 410 (hidroxilciklus) gyanta segítségével. A kiadásért felel:.a Közgázdasá, A szabad tripeptid-amidot az ioncsere után kapott párlási maradékból acetonos eldörzsöléssel izoláljuk. Ily módon 1,9 g (90%) terméket kapunk. Rf 0,25—0,35 n.butanol-ecetsav-etilacetát-víz rendszerben. [a]o = 5 - 63° (c = l, vízben). Aminsav analízis: Glu = 1,00, His = 1,01, Pro =0,99, NH3 = 1,0. Szabadalmi igénypontok 10 1. Eljárás vízoldékony peptidamidok és azok terminális és oldalláncban levő amino- és/vagy karboxilés/vagy merkapto-funkciós csoportján lehasítható védőcsoporttal védett származékainak a peptid-kémiában 15 szokásos módon történő előállítására, az alkotó aminosavak vagy ezek védett származékai egyenkénti vagy csoportos kapcsolása útján, azzal jellemezve, hogy a savamidcsoportot tartalmazó aminosavat vagy a terminális savamidcsoportot tartalmazó peptidfragmenst 20 vagy ezek védett származékát hidrofób szubsztituens bevitelére alkalmas vegyülettel, előnyösen 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzhidril-aminnal reagáltatjuk és az így kapott savamid csoporton hidrofób csoportot tartalmazó peptidamidról a peptid felépítése után kívánt 25 esetben a funkciós csoportokon levő védőcsoportokat vagy ezek egy részét, kívánt esetben a hidrofób szubsztituenssel együtt eltávolítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a tireotropint-felszabadító hormon előállítására, azzal 30 jellemezve, hogy a kiindulási vegyületként használt karbobenzoxi-prolint 2,4,2',4'-tetrametoxi-benzhidrilaminnal reagáltatjuk és az így kapott hidrofób szubsztituenst tartalmazó prolinamidot kapcsoljuk a további aminosavakkal. 35 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a lazac tirokalcitonin 1—10-nek az amino-terminálisán és merkapto-csoportján védett dekapeptid fragmensének előállítására, azzal jellemezve, hogy a kiindulási vegyületként használt karbobenzoxi-aszpara-40 gint 4,4'-dimetoxi-benzhidrollal reagáltatjuk, az így kapott vegyületet hidroxiszukcinimidészterré alakítjuk és az így kapott hidrofób szubsztituenst tartalmazó aszparagin-származékot kapcsoljuk a további aminosavakkal. 45 4. Az 1. igénypont foganatosítási módja a lazac tirokalcitonin 24—28-nak az amino-terminálisán és guanidino-csoportján védett pentapeptid fragmensének előállítására, azzal jellemezve, hogy a kiindulási vegyületként használt aszparagint 4,4'-dimetoxi-benzhidrollal 50 reagáltatjuk, és az így kapott hidrofób szubsztituenst tartalmazó aszparagin-származékot kapcsoljuk a további aminosavakkal. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a lazac tirokalcitonin 29—32 tetrapeptidamid 55 fragmensének előállítására azzal jellemezve, hogy a kiindulási vegyületként használt karbobenzoxi-prolinamidot 4,4'-dimetoxi-benzhidrollal reagáltatjuk és az így kapott hidrofób szubsztituenst tartalmazó prolinszármazékot kapcsoljuk a további aminosavakkal. ;1 és Jogi könyvkiadó igazgatója 76.2762.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 7
