166364. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kreatinin-amidohidroláz és adott esetben kreatin-amidinohidroláz kinyerésére

166364 10 hidroláz-aktivitással rendelkező mikroorganizmusokból, célszerűen Alcaligenes specieshez tartozó törzsekből, azzal jellemezve, hogy a törzs kreatinin-amidohidrolázt tartalmazó sejtanyagát feltárjuk, a vízoldható feltárási frakcióból önmagában ismert módon, 7-nél magasabb pH-értéknél tisztítási, illetve frakcionálási műveletet hajtunk végre, melynek során az enzimaktivitást a kreatininból képződött kreatint önmagában ismert módon meghatározva ellenőrizzük, a kreatinin-amidohidrolázt megtisztítjuk a szennyező proteinektől, és végül adott esetben a kreatin-amidinohidrolázt az ily módon kapott kreatinin-amidohidroláztól ioncserélő-kromatográfiás úton elválasztjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy mechanikai feltárást végzünk, előnyösen nagynyomású diszpergálás, ultrahang vagy zúzómalom alkalmazásával. 10 15 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzaljellemezve, hogy polietilénimines frakcionálási végzünk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzaljellemezve, hogy kb. 0,1 mólos pufferkoncentrációnál végezzük a polietilénimines frakcionálást. 5. Az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 7-nél magasabb pH-értéknél végrehajtandó tisztítási műveletként kétlépéses izopropanolos kicsapást végzünk. 6. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzaljellemezve, hogy a szennyező proteinektől megtisztított enzimproteint egy gyengén bázikus ioncserélőn, 0,1 mól ionkoncentráció alatti értéknél adszorbeáltatjuk, az ioncserélőt 0,1 mólos pufferral mossuk, majd a kreatinin-amidohidrolázt és a kreatin-amidohidrolázt 0,2 mól, illetve 0,5 mól ionkoncentrációnál eluáljuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.2748,§<M2 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató