166363. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Bu 1975-antibiotikum-keverék és összetevői előállítására
21 166363 22 sékleten folytatjuk, miközben 250 percenkénti fordulatszámmal keverjük a tenyészetet és percenként 10 liter levegőt buborékoltatunk át rajta. A tenyésztés 11. órájában jó növekedés figyelhető meg, a táptalaj pH-ja 6,0. 11 és fél órás korban 1 liter inokulummal 10 liter steril táptalajt (1. az 1. példát) oltunk. A tenyésztést 28 C° hőmérsékleten, a tenyészeten percenként 11,5 liter levegőt átvezetve folytatjuk. Az igen erős habzás gátlására szilikon-alapú (KM—70) habgátlót adagolunk. A tenyészet a 70. órában éri el a legmagasabb hatóanyagtartalmat, ekkor pH-ja 8,2. A megkülönböztető, Bacillus subtilis PCI 219 és Klebsiella pneumoniae A20680 törzsekkel kivitelezett mérések szerint a tenyészlé milliliterenként 79 mikrogramm A (Ax + A 2 ) és 49 mikrogramm C (Q + C2 ) jelű vegyületet tartalmaz. 10 15 fogatúra töményítjük. A sűrítmény 11,3 gramm A és 7,3 gramm C jelű vegyületet tartalmaz. A sűrítményt nbutanollal extraháljuk a szennyezőanyagként jelenlevő B vegyület eltávolítására, a vizes fázist 200 milliliter Amberlite CG—50 gyantával (NH4 ®-ciklusú) keverjük. Elkülönítjük a gyantát, 5 liter vízzel mossuk és azután CG—50 gyantát tartalmazó (NH4 ®-ciklusú, 1500 milliliter) oszlopra öntjük. Az oszlopot 7 liter 0,25n vizes ammóniumhidroxiddal készítjük. Az antibiotikumot 0,5n vizes ammóniumhidroxiddal elualjuk, az eluátumokat szakaszosan gyűjtjük össze. A 491—800. számú frakciókból 7,2 gramm A, a 931—1370. számú frakciókból 4,2 gramm C jelű vegyületet kapunk. A 801— 930 számú frakciókból 1,8 gramm, A és C vegyületekből álló keveréket kapunk. 6. példa Nagyobb léptékű fermentációt hajtunk végre 100 literes és 300 literes kísérleti üzemi fermentorban. A fermentációs körülményeket az 5. példában leírtakhoz hasonlóan választjuk meg, azzal a különbséggel, hogy a keverést 180 fordulat/percre és a tenyésztési hőmérsékletet 32 C°-ra állítjuk be. 50 órán át tartó tenyésztés után (pH 8,7) a tenyészlé milliliterenként 95 mikrogramm A és 45 mikrogramm C jelű vegyületet tartalmaz. 7. példa 650 liter, milliliterenként körülbelül 20 mikrogramm C jelű vegyületet tartalmazó összegyűjtött tenyészlé (két 300 literes fermentorból) pH-ját 8,5-re állítjuk be, majd szűrjük, a szűrletet 8,6 liter Amberlite IRC—50 gyantával (NH4 ®-ciklusú) keverjük össze. A gyantát elkülönítjük, 80 liter vízzel mossuk és ezután 3 X 10 liter In vizes ammóniumhidroxid oldattal elualjuk. Az eluátumokat egyesítjük és csökkentett nyomáson, 35—40 C° hőmérsékleten desztillálva körülbelül 500 milliliter tér-20 25 30 35 40 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a Bu 1975 jelű antibiotikum-keverék és az I és II képleten bemutatott Cx és C 2 jelű vegyületek, a 4'-dezoxiambutirozin A és 4'-dezoxiambutirozin B és ezen vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható savaddíciós sóinak előállítására mikrobiológiai úton, azzal jellemezve, hogy Bacillus circulans subsp. n. croceus ATCC 21820, Bacillus circulans subsp. n. proteophilus ATCC 21821 vagy Bacillus circulans subsp. n. biotinicus ATCC 21822 törzseket levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztünk, majd a Bu 1975 jelű antibiotikum-keveréket ismert eljárásokkal elkülönítjük, és adott esetben a Bu 1975 jelű antibiotikum-keverékből ismert eljárásokkal elkülönítjük a Cx és C2 jelű vegyületeket. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a tenyésztést rázott lombikokban végezzük. 3. Az 1. és 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az I és II képletű Cx és C 2 vegyületeket a Bu 1975 antibiotikum-keverékből oszlopkromatográfiás úton különítjük el. 1 lap rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.2748,66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 11
